[发明专利]一种人视网膜Muller细胞的分离及培养方法在审
| 申请号： | 201810346628.5 | 申请日： | 2018-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN110387351A | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人视网膜 细胞 无菌 视网膜病变 视网膜组织 完全培养基 消化 角膜捐献 接种培养 实验材料 手术切除 细胞传代 细胞形态 正常眼球 混合胶 原酶 重悬 显微镜 洗涤 过滤 剥离 解剖 取出 损伤 观察 研究 | ||
1.一种人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌取出角膜捐献者手术切除的正常眼球，修剪去除周边结缔组织和肌肉，然后在解剖显微镜下剥离视网膜组织，再以预冷含双抗的PBS缓冲液反复清洗后，置于此种双抗PBS缓冲液中浸泡10min；(2) 将视网膜组织剪成1mm×1mm×1mm组织碎片，加入I型和IV型混合胶原酶消化；(3) 用含胎牛血清和双抗的DMEM/F12培养基终止消化，经过200目不锈钢筛网过滤，滤液1200～1500rpm离心5min，去掉上清液，保留沉淀；(4) 完全培养基配制：DMEM/F12培养基中加入胎牛血清，碱性成纤维细胞生长因子，普通胰岛素，青霉素和链霉素；(5) 沉淀加完全培养基重悬，接种多聚赖氨酸包被的25cm2培养瓶，于37℃、5%CO2培养箱培养；(6) 接种24h后进行首次换液，之后每隔2～3d换液；(7) 细胞传代与纯化；(8) 细胞形态观察与鉴定。
2.根据权利要求1所述的人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(1)所述的预冷PBS缓冲液浓度为0.01M，PH值为7.2～7.4。
3.根据权利要求1所述的人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(2)所述的I型和IV型混合胶原酶浓度为0.1%。
4.根据权利要求1所述的人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(3)所述的胎牛血清浓度为10%，双抗浓度为青霉素100u/ml，链霉素100ug/ml。
5.根据权利要求1所述的人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(4)所述的培养基为含10%胎牛血清，100u/ml青霉素，100ug/ml链霉素、5ng/ml碱性成纤维细胞生长因子和5mg/L普通胰岛素的DMEM/F12培养基，PH值为7.2～7.4。
6.根据权利要求1所述的人视网膜Muller细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(5)所述的培养瓶用浓度为0.01%的多聚赖氨酸包被。
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