[发明专利]水样中环境内分泌干扰物的磁固相萃取-HPLC-紫外检测方法

权利要求书

1.一种水样中环境内分泌干扰物的磁固相萃取-HPLC-紫外检测方法，所述的内分泌干扰物为雌酮、β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔基雌二醇、雄烯二酮、双酚A和己烷雌酚；其特征在于，步骤如下：

1）将磁性氧化石墨烯加入盛有待测水样的容器中，然后对水样进行振荡，使水样中的环境内分泌干扰物充分吸附于磁性氧化石墨烯上；

2）将振荡后的容器放在磁铁上，待磁性氧化石墨烯与上清液分离后，去除上清液并用超纯水将容器底部的磁性氧化石墨烯转移至敞口容器中；

3）将敞口容器放在磁铁上，待磁性氧化石墨烯与上清液分离后，去除上清液再向底部的磁性氧化石墨烯中加入洗脱液，对磁性氧化石墨烯上的待测环境内分泌干扰物进行洗脱；

4）收集洗脱液，并氮吹至干，最后加入乙腈水溶液定容，微孔滤膜过滤制得待测样品；

5）对所述待测样品中的环境内分泌干扰物含量进行HPLC分析；

所述超纯水的加入量不多于50 mL；所述洗脱液为丙酮和含1%乙酸的丙酮，且洗脱时依次加入5 mL丙酮和5 mL含1%乙酸的丙酮；所述的乙腈水溶液的浓度为57%，v/v；所述的微孔滤膜孔径为0.22 μm；所述HPLC分析所采用的色谱柱为Agilent Zorbax XDB-C18柱，型号为5 μm，4.6×150 mm，柱温为35℃，紫外检测波长为230 nm，进样量20 μL，流动相为体积百分数为57%乙腈水溶液，流速为0.7 mL/min；所述的磁性氧化石墨烯为经过十二胺改性后的磁性氧化石墨烯，其制备方法如下：

1）氧化石墨烯的制备：将23 mL浓硫酸，1 g石墨粉和0.5 g硝酸钠在冰水浴条件下搅拌1 h，使其充分混合均匀；之后缓慢加入3 g高锰酸钾，将温度调节至15 ℃，搅拌1 h；然后升温至35 ℃，继续搅拌5 h后加入另外的3 g高锰酸钾，35℃下搅拌12 h；之后加入140 mL超纯水搅拌30 min，最后加入1 mL 30 %的双氧水，得到亮黄色溶液，终止反应；将反应得到的溶液在8000 rpm的转速下进行离心，弃去上清液，用200 mL 30%的盐酸溶液和超纯水将沉淀物反复清洗至上清液的pH为4-5为止，收集下层沉淀，置于30 ℃真空干燥箱中干燥24 h得到GO；

2）磁性氧化石墨烯的制备：取0.3 g GO固体溶于100 mL超纯水中，超声1 h使其充分溶解，得到分散均匀的黄色GO溶液；取0.01 mol FeCl₂·4H₂O与0.02 mol FeCl₃·6H₂O溶于10mL超纯水中，超声10 min，通氮气30 min后将其逐滴加入GO溶液得到混合溶液；将混合溶液在氮气气氛保护下搅拌2 h，再将体系升温至65℃后，以10 滴/min的速度加入28 % 的氨水，将体系pH调节至11，搅拌2 h；反应停止后收集得到的黑色沉淀，并用乙醇和超纯水进行多次洗涤，得到的固体置于40℃真空干燥箱中干燥12 h，得到MGO；

3）磁性氧化石墨烯的修饰：称取0.4 g MGO分散于10 mL超纯水中得到MGO溶液，0.3 g十二胺溶于10 mL乙醇中得到DDA溶液，将MGO溶液和DDA溶液在锥形瓶中混合，于室温下搅拌20 h，得到的固体用乙醇，超纯水和丙酮反复洗涤后，置于40 ℃真空干燥箱中干燥，得到经十二胺改性的磁性氧化石墨烯MGO-DDA。