[发明专利]基于复合编码探针杂交的DNA检测方法及复合编码探针

权利要求书

1.基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.根据待测靶标基因的特异性序列合成复合编码探针；

所述复合编码探针为由第一子探针和第二子探针部分配对所形成的一双发卡结构的核酸序列，其包含：loop环状区、茎末端区和修饰基团区；

所述第一子探针和第二子探针上位于茎末端区的碱基序列相互配对，所述第一子探针和第二子探针上位于loop环状区的碱基序列分别与待测靶标基因的正义链和反义链的不同区域的碱基序列构成互补序列；

所述修饰基团区的数量为二，该修饰基团区包括相配合的荧光基团和淬灭基团；

b.根据待测靶标基因的特异性序列合成上游引物和下游引物；

c.采用上述获得的探针和引物构建反应体系，对待测靶标基因进行PCR扩增；

d.在PCR扩增反应结束后，收集PCR产物的荧光信号以形成相应的扩增曲线，对待测靶标基因进行分析。

2.如权利要求1所述的基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于：

所述茎末端区的数量为二，所述loop环状区的两端分别连接所述两个茎末端区，该两个茎末端区的另一端分别连接所述两个修饰基团区，使得两个修饰基团区位于复合编码探针的两端。

3.如权利要求2所述的基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于：

所述两个修饰基团分别为第一修饰基团和第二修饰基团；

第一修饰基团和第二修饰基团的所包含的两个荧光基团分别位于同一子探针上的5'端和3'端。

4.如权利要求2所述的基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于：

所述两个修饰基团分别为第一修饰基团和第二修饰基团；

第一修饰基团和第二修饰基团的所包含的两个荧光基团分别位于不同的子探针上的5'端或3'端。

5.如权利要求3或4中任一项所述的基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于：

所述第一荧光基团和第二荧光基团分别采用以下所述基团中的一种，其包括但不限于：ALEXA350、FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Texas Red、Cy5、Cy5.5、TAMRA；

所述第一淬灭基团和第二淬灭基团分别采用以下所述基团中的一种，其包括但不限于：Dabcyl、BHQ-1、BHQ-2、QYS-7。

6.如权利要求2所述的基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于：

所述第一子探针和第二子探针为可用于FQ-PCR的荧光探针，可采用以下探针中的一种，其包括但不限于：水解探针、MGB探针、分子信标探针、置换探针、蝎子引物、Amplifier引物。

7.如权利要求2所述的基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于：

所述loop环状区的长度为包括15-40个碱基对；所述茎末端区的长度为包括6-20个碱基对。

8.如权利要求2所述的基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于：

第一子探针和第二子探针上位于所述的茎末端区的碱基序列与待测靶标基因的特异性序列不相关。

9.如权利要求2所述的基于复合编码探针杂交的DNA检测方法，其特征在于：

所述步骤c中的PCR扩增，其变性温度为95℃、退火温度为60℃、延伸温度为72℃。

10.一种复合编码探针，适用于基于聚合酶链式反应的DNA检测方法，其特征在于：所述复合编码探针是上述权利要求1-8中任一项所述的复合编码探针。