[发明专利]一种大豆蛋白肽及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种大豆蛋白肽及其制备方法和应用。所述大豆蛋白肽采用如下步骤制备：（1）将大豆分离蛋白与超纯水混合，调节pH，添加碱性蛋白酶在一定条件下酶解获得粗大豆肽液；（2）使用超滤膜将粗大豆肽液进行超滤分离；（3）采用Sephadex G‑15凝胶柱色谱分离；（4）最后进行冷冻干燥得到该大豆蛋白肽。本发明还提供了大豆蛋白肽的用途。本发明以大豆分离蛋白为原料，得到的大豆蛋白肽对成骨细胞具有显著的促进增殖作用。

技术领域

本发明涉及一种大豆蛋白肽及其制备方法和应用，属于食品加工技术领域。

背景技术

骨质疏松症是一种因钙化骨密度降低、骨质致密物逐渐消失而导致骨髓腔扩大的系统性的骨骼疾病，其特征是骨组织的骨质量变低，骨质脆性增加，易发生骨折，是一项严重的健康问题，据研究表明骨质疏松症正影响着全球数千万人的健康。骨质量受多种因素的影响，包括遗传、营养、荷尔蒙变化、体育锻炼和生活习惯。而老龄化、运动不足、低体重、吸烟、低钙饮食、绝经和卵巢切除都是骨质疏松症的致病原因。尽管目前已有许多抗骨质疏松药物如双膦酸盐，选择性雌激素受体调节剂和降钙素等，但长期使用这些药物会导致严重的副作用，开发具有防治骨质疏松功能但无副作用的功能性食品成分是有益的。

大豆是中国第四大粮食作物，2016/17年度中国大豆总产量1294万吨，比上年度增加133万吨，预测2017/18年度，大豆总产量将达到1473万吨。大豆中蛋白质含量高达40%，是一种优质植物蛋白来源，作为大宗农产品加工的主要副产物，大豆蛋白有着丰富的来源和较高的产量，并且有着较高的营养价值。大豆蛋白的研究与利用已引起人们广泛的关注。而为了进一步提高大豆蛋白产品的营养性以及产品附加值，大豆多肽的研究成为了热门研究课题。

大豆多肽是通过将大豆蛋白水解,并进行进一步处理得到的分解产物。研究表明大豆多肽具有良好的生物活性,如降血压、降血糖、抗氧化以及增强骨密度等。Evans等人发现大豆蛋白水解物能够降低绝经后妇女的骨转换，Omim等人用大豆多肤喂养骨成型的小鼠,结果表明大豆多肽可明显增强小鼠的机械骨强度。但未有研究提及分子量大小的大豆蛋白肽对促进成骨细胞增殖活性的作用。

发明内容

本发明目的是提供一种具有促进成骨细胞增殖活性的大豆蛋白肽的制备方法，获得的大豆蛋白肽能够显著促进成骨细胞的增殖，提高了大豆蛋白的综合价值。

本发明的一种大豆蛋白肽的制备方法，具体包含以下步骤：

一、原料预处理：将大豆分离蛋白溶于超纯水中，配制成3～7%的溶液，调节溶液pH 为7～9；

二、酶解：在步骤一所得溶液中加入碱性蛋白酶，加酶量为800～1600 U/g，酶解温度为50 ℃，酶解时间为3～8 h，90～95 ℃灭酶10～20 min，室温冷却后以3000～4000 r/min离心10～15min，所得上清液即为粗大豆肽液；

三、超滤分离：使用超滤膜对步骤二所得的大豆肽进行超滤分离，收集滤出液，冷冻干燥，得到初步分离纯化的大豆蛋白活性肽；

优选的，所使用超滤膜孔径为1~10KDa超滤膜。

四、葡聚糖凝胶柱层析：选用交联葡聚糖Sephadex G-15对步骤三所得的活性肽样品进行进一步分离，洗脱液为超纯水，蛋白浓度为0.5～2%，流速为1.5 ml/min，检测波长为220 nm，对洗脱所得的蛋白质按出峰曲线合并收集，浓缩后真空冷冻干燥；

五、通过CCK-8法测定步骤四所得的大豆肽对于促进成骨细胞MC3T3-E1增殖的活性，表明所得的大豆肽具有良好的促进成骨细胞增殖活性。

本发明还公开了采用上述方法制备得到的大豆蛋白肽，及所述大豆蛋白肽在制备促进成骨细胞增殖的食品或药品中的应用。