[发明专利]一种HIV-1衣壳蛋白抑制剂高通量筛选模型的建立方法在审
| 申请号： | 201810340716.4 | 申请日： | 2018-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN108872568A | 公开（公告）日： | 2018-11-23 |
| 发明（设计）人： | 张大为;许晓双;徐锡明;许磊;常珊 | 申请（专利权）人： | 江苏理工学院 |
| 主分类号： | G01N33/543 | 分类号： | G01N33/543;G01N33/58;G01N21/64 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 陈丽萍 |
| 地址： | 213001 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光 高通量筛选模型 衣壳蛋白抑制剂 微珠 共振能量转移 时间分辨荧光 抑制剂分子 模型建立 融合标签 生物素化 受体分子 衣壳蛋白 阴性对照 荧光基团 荧光激发 多肽 供体 诱发 强弱 验证 | ||
1.一种HIV-1衣壳蛋白抑制剂高通量筛选模型的建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)模型的建立：反应在在384孔板中进行，反应体系为10ul，将2μl GST-tagged标记的CA-CTD、2μl的Bio-CAI和1μl的缓冲液加入板孔中，室温孵育反应2小时后，每孔中加入2.5μl链霉亲和素标记的Streptavidin-XL665和2.5μl铕标记的Anti-GST-Cryptate，混匀，室温反应1小时，检测665nm和620nm处荧光强度，计算各孔665nm和620nm处荧光强度的比值，得样品荧光比值，确定GST-tagged标记的CA-CTD与Bio-CAI的浓度，即建立了筛选模型；
(2)模型的验证：反应在在384孔板中进行，体系为10ul，配置不同浓度的阳性药物CAI，将1ul阳性药物分别与步骤(1)确定浓度的2μl GST-tagged标记的CA-CTD和2μl Bio-CAI一起加入板孔中，室温孵育反应2小时后，每孔中加入2.5μl链霉亲和素标记的Streptavidin-XL665和2.5μl铕标记的Anti-GST-Cryptate，混匀，室温反应1小时，检测665nm和620nm处荧光强度，计算各孔665nm和620nm处荧光强度的比值，得阳性对照荧光比值；
(3)阴性对照模型建立：反应在在384孔板中进行，体系为10ul，将步骤(1)确定浓度的2μl GST-tagged标记的CA-CTD和2μlBio-CAI一起加入板孔中，室温孵育反应2小时后，每孔中加入2.5μl链霉亲和素标记的Streptavidin-XL665和2.5μl铕标记的Anti-GST-Cryptate，混匀，室温反应1小时，检测665nm和620nm处荧光强度，计算各孔665nm和620nm处荧光强度的比值，得阴性对照荧光比值；
(4)结果：根据以下公式计算各孔的相对抑制率：
当抑制剂分子阻断GST-tagged标记的CA-CTD和2μl Bio-CAI的相互作用时，荧光将会减弱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的缓冲液为含有0.05％吐温-20，2mM二硫苏糖醇，100mM氟化钾的磷酸盐缓冲液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的GST-tagged标记的CA-CTD和Bio-CAI多肽浓度分别为30nM和60nM。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法在HIV-1衣壳蛋白抑制剂高通量筛选中的应用。
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