[发明专利]人血清中25羟基维生素D的检测方法

说明书

本发明涉及一种血清中25羟基维生素D的检测方法，包括样品前处理以及样品检测的步骤，具体为：取人血清样品，加入含有25羟基维生素D内标物的甲醇溶液，然后向所述人血清样品中加入硫酸锌水溶液和甲醇进行蛋白沉淀，充分混匀后加入正己烷溶剂进行萃取，再充分混匀后离心，取上清液并进行干燥后加入复溶液，得到待测样品；再对所述待测样品用超高效液相色谱串联四极杆质谱仪进行检测。本发明的检测方法前处理简单，灵敏度高，特异性、抗基质干扰能力强，检测时间短，所需样品量少，通量高。

技术领域

本发明涉及分析技术领域，特别是涉及一种人血清中25羟基维生素D的检测方法。

背景技术

维生素D是一种脂溶性维生素，是固醇类衍生物，是维持人类身体健康必需的一种化合物。维生素D包括5种化合物，与健康密切相关的是维生素D2和维生素D3。维生素D2和维生素D3经肝脏的单氧化酶(25羟基氧化酶)氧化形成25羟基维生素D2和25羟基维生素D3。25羟基维生素D在血液中的浓度高、循环周期长，因此成为维生素D在人体内的浓度指示剂，是人体维生素D营养状况的评价指标。

目前认为维生素D也是一种类固醇激素，维生素D家族成员中最重要的成员是VD2(麦角钙化醇)和VD3(胆钙化醇)。维生素D2多含于植物性食物中，它是由植物的麦角固醇经阳光照射而合成的。维生素D3占人体维生素D总量90％-95％，主要是由皮肤内的7-脱氢胆固醇在特定波长的紫外线照射作用下合成，也可通过食物摄取获得。维生素D具有调节人体血清钙磷代谢，维持骨骼和肌肉的正常生理作用。随着对于维生素D的深入研究发现，人群中维生素D缺乏普遍存在，且维生素D缺乏与各类疾病的发生和发展密切相关，比如肥胖、高血压、糖尿病、心梗等疾病，近年来，许多研究都发现机体维生素D水平与肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、代谢综合征等存在相关的风险因素。因此维生素D缺乏与各类疾病的相互关系引起国内外研究机构的广泛关注。

对于维生素D缺乏的相关研究必然需要开发对血液中维生素D的准确的检测方法。目前国际普遍认为LC-MS/MS是检测血清中25羟基维生素D的“金标准”，但是相关领域开发的基于高效液相色谱串联质谱仪检测25羟基维生素D的方法，普遍采用C18柱作为色谱柱，其灵敏度较低，每次实验所需样品量较大。

发明内容

基于此，本发明提供了一种人血清中25羟基维生素D的检测方法，该方法的检测灵敏度高，样品需要量少。

具体技术方案如下：

一种人血清中25羟基维生素D的检测方法，包括以下步骤：

样品前处理：取人血清样品，加入含有25羟基维生素D内标物的甲醇溶液，然后向所述人血清样品中加入硫酸锌水溶液和甲醇进行蛋白沉淀，充分混匀后加入正己烷溶剂进行萃取，再充分混匀后离心，取上清液并进行干燥后加入复溶液，得到待测样品；

样品检测：对所述待测样品用超高效液相色谱串联四极杆质谱仪进行检测，

其中，超高效液相色谱的条件包括：

色谱柱：WatersACQUITY UPLC HSS T3Column,2.1×50mm,1.8μm；

色谱柱温度：37℃-43℃；

进样量：18-22uL；

流速：0.42-0.48mL/min；

流动相：流动相A为含有1.8-2.2mM醋酸铵和0.09-0.11v/v％甲酸的水溶液，流动相B为含有1.8-2.2mM醋酸铵和0..09-0.11v/v％甲酸的甲醇溶液，梯度洗脱；

所述25羟基维生素D为25羟基维生素D2和/或25羟基维生素D3，所述25羟基维生素D内标物为3d-25羟基维生素D2和/或6d-25羟基维生素D3。