[发明专利]一种谷氨酸棒杆菌重组蛋白高效表达系统的构建及应用

权利要求书

1.一种制备重组谷氨酸棒杆菌的方法，包括如下步骤：将T7RNA聚合酶基因整合在谷氨酸棒杆菌的基因组上，且将目的蛋白编码基因、驱动所述目的蛋白编码基因表达的T7启动子、LacY基因、LacZ基因以及驱动LacY基因和LacZ基因表达的启动子以质粒的形式导入所述谷氨酸棒杆菌中，得到重组菌；

所述将T7RNA聚合酶基因整合在谷氨酸棒杆菌的基因组上为将含有T7RNA聚合酶基因的同源片段通过重组载体导入所述谷氨酸棒杆菌中；

所述目的蛋白的编码基因为超氧化物歧化酶基因；

所述质粒为将如下片段按照如下顺序插入表达载体得到：含有T7启动子的PT7片段、含有RBS以及超氧化物歧化酶基因的片段2、由lac片段和驱动其表达的启动子PglyA组成的片段；

所述lac片段包括所述LacY基因和所述LacZ基因；

所述谷氨酸棒杆菌为谷氨酸棒杆菌ATCC13032；

所述含有T7RNA聚合酶基因的同源片段的核苷酸序列为序列1；

所述含有T7启动子的PT7片段的核苷酸序列为序列2；

所述含有RBS以及超氧化物歧化酶基因的片段2的核苷酸序列为序列5；

所述由lac片段和驱动其表达的启动子PglyA组成的片段的核苷酸序列为序列3；

所述表达载体为pXMJ19。

2.由权利要求1所述的方法制备的重组谷氨酸棒杆菌。

3.一种乳糖诱导表达超氧化物歧化酶的方法，包括如下步骤：在乳糖诱导下发酵权利要求2所述的重组谷氨酸棒杆菌，实现乳糖诱导表达超氧化物歧化酶。