[发明专利]一种抗真菌药物靶点及其制备和应用

说明书

本发明涉及一种抗真菌药物靶点及其制备和应用，所述抗真菌药物靶点为白色念珠菌翻译起始因子蛋白Tif1，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。利用该靶点通过高通量筛选技术进行针对该靶点的抗真菌药物筛选，最终得到一个抑制剂和一个激活剂，并对化合物与该靶点蛋白之间的相互作用进行了相关研究，证明利用该靶点进行药物筛选是可行的。

技术领域

本发明属于药物靶点材料及其制备和应用领域，特别涉及一种抗真菌药物靶点及其制备和应用。

背景技术

在生态系统中，真菌作为其中的分解者、某些食物及抗生素的生产者、科学研究中的模式生物，其地位不可替代。在地球上1500万种真菌中，只有150种会导致人类及其他哺乳动物生病，而在临床上发现的病原菌则更少。据研究表明，真菌的毒性作用主要是由于生态系统中的捕食者(如变形虫、蠕虫等)所施加的生存压力而通过进化得来。因此，病原性真菌的致病机理各不相同。

自从20世纪80年代以来，由于多种免疫缺陷类疾病的出现及各种外科手术技术手段的发展，真菌成为了人类疾病的主导因素之一。真菌感染主要分为浅部真菌感染和深部真菌感染，深部真菌感染又叫做侵袭性真菌感染(invasive fungal infection，IFIs)，浅部真菌感染指的是发生在皮肤表层的感染，而IFIs是指在深部组织、内脏及全身发生的真菌感染。在人类环境中，最主要的致病真菌有三大类：白色念珠菌(Candida Albicans)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、曲霉菌(Aspergillusfumigatus)。这三种真菌已经与宿主建立了稳定的寄生关系，并在宿主的免疫能力因免疫抑制或遭受严重疾病而降低时快速生长，从而使宿主发生真菌感染类疾病。在临床上，80％的侵袭性真菌感染均由念珠菌属造成。

近几年来，器官移植等外科技术手段的进步以及艾滋等免疫缺陷类疾病的出现，使得侵袭性真菌病的感染率和致死率一直居高不下。一方面，临床上病原菌对现有抗真菌药物的耐药性不断出现；另一方面，现有抗真菌药物对患者自身的副作用较大，因此，新药物靶点和新型抗真菌药物的研发一直以来都是实验室基础研究及企业应用研究的热点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗真菌药物靶点及其制备和应用，本发明以tif1蛋白为靶点进行高通量药物筛选，证明该蛋白是一个可靠的靶点，可用来进行新型的抗真菌药物研发，为现有抗真菌药物研发提供一个新的思路和方向。

本发明的目的还在于提供上述的Ca-tif1蛋白作为靶点进行抗真菌药物的筛选，该药物是抑制Ca-tif1蛋白ATP水解酶活性的药物，该药物可以抑制该蛋白对ATP的水解能力。

本发明的目的还在于提供上述的Ca-tif1蛋白作为靶点进行抗真菌药物的筛选，该药物是激活Ca-tif1蛋白ATP水解酶活性的药物，可以增强该蛋白对ATP的水解能力，从而影响白色念珠菌体内蛋白质翻译起始过程的运作。

本发明的一种抗真菌药物靶点，其特征在于：所述抗真菌药物靶点为白色念珠菌翻译起始因子蛋白Tif1，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

所述蛋白属于DEAD-BOX解旋酶家族的蛋白，该家族蛋白均具有ATP水解酶和RNA解旋酶的活性，影响其ATP酶活性，可影响真菌生长。

本发明的一种抗真菌药物靶点的制备方法，包括：

(1)将白色念珠菌体内翻译起始因子Ca-tif1的原核表达载体转入大肠杆菌BL21感受态细胞中，恒温培养后挑取单克隆进行活化，然后转入培养基中培养至OD₆₀₀到0.6～0.8；

(2)将菌液中加入诱导剂，恒温培养，得到诱导后菌液，然后进行电泳，染色，脱色，最后进行蛋白纯化。

所述步骤(1)中白色念珠菌体内翻译起始因子Ca-tif1的原核表达载体为pET-28a-Ca-tif1。