[发明专利]基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法

说明书

本发明提供了一种基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法，涉及食品检测领域。该方法包括总RNA的提取与纯化、逆转录反应制备cDNA模板、多重PCR反应、毛细管电泳得到基因电泳图谱、图谱数据分析得到麦芽水解相关基因的表达峰高H、利用麦芽水解相关基因的表达峰高H计算麦芽浸出率，针对麦芽水解相关基因LD，AMY1，AMY4，GLU，ASP，CYS，SERⅠ，SERⅢ，MET，TRX，PDI，SEP，WRKY和内控基因ACT。该方法能够基于淀粉、蛋白水解酶的基因表达监控，建立预测麦芽浸出率的方法，从而用于评价麦芽浸出率；与传统的测定方法相比，准确度高，效率高且方法简便。

技术领域

本发明涉及食品检测领域，尤其涉及一种基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法。

背景技术

啤酒中的各种组分来源于麦芽、酒花、酵母。麦芽的质量好坏直接影响着啤酒的质量。麦芽为酵母发酵提供糖、氨基酸等营养物质，为啤酒泡沫提供蛋白、多糖等生物大分子骨架，同时增加啤酒醇厚柔滑的口感。麦芽对啤酒的生产、质量、成本、风味稳定起着举足轻重的作用。选择高品质的麦芽，成为啤酒生产企业的生产高质量啤酒的关键。

评价麦芽质量的指标很多，其中浸出率是一个关键指标。浸出率是指从麦芽中浸出并溶解于水的干物质占麦芽干物质的百分比，浸出率高收得率就高。它包括了麦芽本身的可溶性物质和在糖化时经酶作用形成的可溶性物质，因此说浸出率反映了大麦在制麦芽过程中，麦芽溶解的程度和形成酶的数量，同时也反映了大麦经制麦成为干麦芽后，麦粒干物质的损失多少的特性。

目前使用的浸出率测定方法是通过用标准协定糖化法测定生成麦汁的糖度、密度等指标，然后换算成浸出率。这种方法存在滞后性，无法在大麦萌发阶段提前做出判断。此外该方法操作繁琐、复杂，费时费力。如果能建立起一种更加快速的预测方法，从大麦萌发初期就能预测麦芽浸出率，就能为制麦工艺调整提供依据，快速指导生产。

而向源头追溯，麦芽浸出率的差异则是由于制麦过程中淀粉、蛋白水解酶的差异造成。胚乳的溶解，首先是生成的蛋白酶作用于胚乳细胞壁间的蛋白质，接着葡聚糖酶，戊聚糖酶和半纤维素酶分解细胞壁使其形成多孔结构，随后淀粉酶和蛋白酶等进入胚乳细胞内，进行一系列分解反应，致使胚乳组织疏松，并且淀粉质外露而呈现粉状结构。从溶解过程可以看出，酶在制麦过程中发挥了十分重要的作用。这些水解酶的种类和活性直接决定着胚乳的溶解状况，进而决定了麦芽质量。而这些水解酶的活性则由制麦过程中相关基因的表达量高低决定。目前并没有基于这些水解酶基因的浸出率评价方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法，基于淀粉、蛋白水解酶的基因表达监控，建立预测麦芽浸出率的方法，从而用于评价麦芽浸出率；与传统的测定方法相比，准确度高，效率高且方法简便。

为了达到上述目的，本发明提供了一种基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法，包括总RNA的提取与纯化、逆转录反应制备cDNA模板、多重PCR反应、毛细管电泳得到基因电泳图谱、图谱数据分析得到麦芽水解相关基因的表达峰高H、利用麦芽水解相关基因的表达峰高H计算麦芽浸出率，

针对麦芽水解相关基因LD，AMY1，AMY4，GLU，ASP，CYS，SERⅠ，SERⅢ，MET，TRX，PDI，SEP，WRKY和内控基因ACT；

逆转录反应制备cDNA模板应用引物为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.28；