[发明专利]基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法

权利要求书

1.基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法，其特征在于，包括总RNA 的提取与纯化、逆转录反应制备cDNA模板、多重PCR反应、毛细管电泳得到基因电泳图谱、图谱数据分析得到麦芽水解相关基因的表达峰高H、利用麦芽水解相关基因的表达峰高H计算麦芽浸出率，

针对麦芽水解相关基因LD，AMY1，AMY4，GLU，ASP，CYS，SERⅠ，SERⅢ，MET，TRX，PDI，SEP，WRKY和内控基因ACT；

逆转录反应制备cDNA模板应用引物为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.28,合成cDNA第一链；

以所述的cDNA第一链为模板进行多重PCR反应，多重PCR反应中应用引物为SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ IDNO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ IDNO.25和SEQ ID NO.27；

其中，利用上述麦芽水解相关基因的表达峰高H计算麦芽浸出率的公式如下：

麦芽浸出率=82.864+10*[0.233*H(AMY1)/H(ACT)-0.272* H(TRX)/H(ACT)-0.207*H(SERⅠ)/H(ACT)+0.381*H(MET)/H(ACT)+

0.195*H(CYS)/H(ACT)+0.061*H(PDI)/H(ACT)-0.182*H(ASP)/H(ACT)+0.009*H(SEP)/H(ACT)-0.122*H(WRKY)/H(ACT)-0.970*H(LD)/H(ACT)-2.094*H(AMY4)/H(ACT)-0.088*H(GLU)/H(ACT)+0.097*H(SERⅢ)/H(ACT)]。

2.根据权利要求1所述的基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法，其特征在于，所述多重PCR反应的反应体系中，总反应体系为20μL，其中，25mM MgCl₂ 4.0μL、5×PCR缓冲液4.0μL、DNA聚合酶0.7μL、逆转录反应制备cDNA模板应用引物2μL、多重PCR反应中应用引物9.3μL；扩增参数为：95℃预变性10min；94℃变性30s； 56℃退火30s；71℃延伸1min，循环35次。

3.根据权利要求1-2任一项所述基于基因表达监控的麦芽浸出率评价方法，其特征在于，所述麦芽水解相关基因LD的产物大小为290bp，AMY1的产物大小为148bp，AMY4的产物大小为339bp，GLU的产物大小为374bp，ASP的产物大小为222bp，CYS的产物大小为208bp， SERⅠ的产物大小为180bp，SERⅢ的产物大小为395bp，MET的产物大小为197bp，TRX的产物大小为176bp，PDI的产物大小为218bp，SEP的产物大小为268bp，WRKY的产物大小为283bp；内控基因ACT的产物大小为237bp。