[发明专利]一种乳品中金黄色葡萄球菌的快速检测方法

说明书

本发明属于食品致病菌检测技术领域，具体涉及一种乳品中金黄色葡萄球菌的快速检测方法，包括收集待测样品，制成样品溶液；乳制品前处理；制备纳米氢氧化钛/氢氧化锆固定滤纸圆片；制备纳米氢氧化钛/氢氧化锆固定滤纸圆片处理样品；提取金黄色葡萄球菌DNA；PCR检测。本发明针对金黄色葡萄球菌建立一种从乳品中灵敏快速实用性强无需前增菌的PCR检测方法，检测时间为4小时，且检测限低，检测灵敏度高，不容易出现假阳性或者假阴性结果，可以确保食品从农场到餐桌流通过程中的食品安全实时检测。

技术领域

本发明属于食品致病菌检测技术领域，具体涉及一种乳品中金黄色葡萄球菌的快速检测方法。

背景技术

近年来，全球食源性疾病发病率呈不断上升的趋势。据报道，发达国家每年约30％的人口患食源性疾病。尽管没有关于发展中国家食源性疾病的系统性报道，但情况可能更严重。WHO报告表明，全球食源性疾病患者达数亿人，每年约有几亿腹泻病例，导致约300万5岁以下儿童死亡，其中约70％是因生物源性污染食品所致。在发展中国家，估计每年腹泻及其相关疾病有2.7亿病例，导致240万5岁以下儿童死亡,食源性疾病不但严重危害人们的健康，而且造成大量经济损失。据报道，全球每年发生40-60亿例食源性疾病，发展中国家每年约有180万人口死于食源性疾病，即使是在发达国家，每年亦有10％以上的人群感染食源性疾病。食源性致病菌是引起食源性疾病的首要原因，食源性致病菌对人类健康造成极大危害，是食品安全的重大隐患。食源性疾病并不随经济发展和技术进步而减少或消失，世界范围内食品安全恶性事件接连发生，食源性疾病未能受到有效控制，食源性疾病发生率居高不下，食品安全形势严峻。目前我国对于食源性病原菌的检测、鉴定仍停留在分离培养、形态观察、生化鉴定和血清学分型水平，这些传统的方法操作复杂、检测周期较长，而且无法对难以培养的病原菌进行检测；而一些简单的分子生物学和免疫学方法假阳性或者假阴性率又较高，因此快速、简便、特异的检测方法成为研究的热点。

现有技术中，常用的食源性致病菌快速检测方法简要介绍如下：

1.PCR技术：PCR技术是在1971年首先提出的。该方法通过对人工难以培养的微生物相应DNA片段的扩增，检测扩增产物含量，从而快速地对食品中致病菌含量进行检测。检测时，首先在高温下(95℃)使得蛋白质变性，DNA双链变成单链；再迅速降温(55℃)，每条DNA单链退火，这就是所谓的热循环。之后温度重新上升到95℃，开始新的循环。经一套扩增循环(21到31次)将一个单分子DNA扩增到10⁷分子。整个过程可以在1h内通过自动热量循环器完成。理论上，只要样品中含有一分子沙门氏菌的DNA，通过PCR技术完全可以在短时间内检测到。这种测定方法的优点是测定结果迅速，灵敏度和特异性高，检测成本低。PCR技术采用DNA扩增和自动化程序对特定的致病菌进行检测，己经成功地对沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、单核细胞李斯特菌等致病菌进行了有效测定。

2.酶联免疫法ELISA：抗原-抗体反应法是测定特异性致病菌及其产生毒素最常用的方法。ELISA是利用抗原和抗体之间的反应，在临床医学领域的许多方面都有应用。抗体在抗血清中可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体。这两种抗体在ELISA技术中对于沙门氏菌、大肠杆菌0157:H7、李斯特菌等血清型细菌有很好的检测效果。

3.生物感应器Biosensor：生物传感器主要由生物识别元件和信号转换器两大部分组成。生物识别元件又称感受器，由具有分子识别能力的生物活性物质(如酶、微生物、动植物组织切片)构成。信号转换器(如热敏电阻、光纤等)是一个电化学、光学或热敏检测元件。当生物识别元件与待测物发生特异作用后，所得产物(光、热等)通过信号转换器转变成可以输出的电信号、光信号等，从而达到分析检测的目的。由于生物传感器具有经济、简便、专一性强等特点，在现代食品微生物检测中前景广阔。