[发明专利]一种积累几丁寡糖重组枯草芽孢杆菌及其应用在审
| 申请号： | 201810325444.0 | 申请日： | 2018-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN108531436A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;堵国成;陈坚;凌美希;李江华;刘延峰 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P19/26;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 几丁寡糖 枯草芽孢杆菌 重组枯草芽孢杆菌 积累 乙酰氨基葡萄糖 遗传工程领域 基因工程菌 糖基转移酶 编码基因 表达宿主 代谢工程 根瘤菌 脉根 三糖 四糖 五糖 应用 改造 生产 | ||
1.一种积累几丁寡糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，表达百脉根根瘤菌来源的N-乙酰氨基葡萄糖糖基转移酶。
2.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述N-乙酰氨基葡萄糖糖基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，采用载体pP43NMK表达N-乙酰氨基葡萄糖糖基转移酶。
4.一种构建权利要求1～3任一所述的重组枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)构建重组质粒：克隆百脉根根瘤菌来源的N-乙酰氨基葡萄糖糖基转移酶编码基因nodC，连接到重组表达质粒上；
2)构建产几丁寡糖重组枯草芽孢杆菌：将步骤1)构建的重组表达质粒转化至枯草芽孢杆菌宿主细胞中，得到产几丁寡糖重组枯草芽孢杆菌。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，编码所述N-乙酰氨基葡萄糖糖基转移酶的基因如SEQ ID NO.2所示；所述枯草芽孢杆菌宿主细胞为Bacillus subtilis 168；所述重组表达质粒为pP43NMK。
6.一种生产几丁寡糖的方法，其特征在于，应用权利要求1～3任一所述重组枯草芽孢杆菌进行发酵。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵是在35～37℃发酵36～54h。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将35～37℃、200～220rpm下培养10～16h的重组枯草芽孢杆菌以按体积计3～5％的接种量转入发酵培养基，于35～37℃发酵36～54h。
9.一种提高枯草芽孢杆菌积累几丁寡糖能力的方法，其特征在于，表达百脉根根瘤菌来源的N-乙酰氨基葡萄糖糖基转移酶。
10.权利要求1～3任一所述的重组枯草芽孢杆菌在食品、医药、化工领域发酵制备产品中的应用。
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