[发明专利]一种有机磷降解活性纳米颗粒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种生产有机磷降解活性纳米颗粒的工程菌，其特征在于，其是在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中表达β-酮基硫解酶phaA、乙酰乙酰CoA还原酶phaB、有机磷酸酐水解酶与聚羟基脂肪酸酯合成酶的融合蛋白OPAAphaC和有机磷酸酐水解酶与聚羟基脂肪酸酯结合蛋白的融合蛋白(phaP)3OPAA；

所述的β-酮基硫解酶phaA的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，

所述的乙酰乙酰CoA还原酶phaB的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，

所述的有机磷酸酐水解酶与聚羟基脂肪酸酯合成酶的融合蛋白OPAAphaC的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，

所述的有机磷酸酐水解酶与聚羟基脂肪酸酯结合蛋白的融合蛋白(phaP)3OPAA的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种有机磷降解活性纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其是将权利要求1所述的工程菌进行发酵培养，然后经细胞破碎、超速离心分离、超滤洗涤制备得到有机磷降解活性纳米颗粒。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.将权利要求1所述的工程菌进行发酵培养，发酵培养基为所述的工程菌的常规发酵培养基并添加有0.5～10g/L乳糖或0.1～2mmol/L异丙基硫代半乳糖苷作为诱导剂，培养温度为15～37℃；

b.收集步骤a的诱导发酵液，离心，弃上清，洗涤菌体，然后再用pH7.5的10mM磷酸盐缓冲液重悬菌体，将菌悬液超声破碎30min，超声5s、间歇5s，充分裂解菌体细胞，然后将细胞裂解液用甘油密度梯度离心，80000～100000g离心2～4h，离心后将聚羟基脂肪酸酯颗粒层取出，加入无菌水，使用100kDa～300kDa截留分子量的超滤管进行多次洗涤，冷冻干燥即得有机磷降解活性纳米颗粒。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的工程菌的常规发酵培养基含有蛋白胨1～30g/L，酵母粉1～30g/L，氯化钠0.5～15g/L。

5.一种根据权利要求2-4任一所述的方法制备得到的有机磷降解活性纳米颗粒。

6.根据权利要求5所述的有机磷降解活性纳米颗粒，其特征在于，其直径为20-100nm。

7.权利要求5所述的有机磷降解活性纳米颗粒在降解有机磷污染物中的应用。