[发明专利]一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法及应用

权利要求书

1.一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法，其特征在于该电化学法拉第笼免疫传感器通过以下方法构建的：

首先，制备多肽/金电极peptide/Au：分别取乙酰转移酶p300与多肽、乙酰辅酶A在磷酸缓冲溶液PBS中充分混合，于恒温水浴锅中孵育，获得催化反应液，取催化反应液滴涂于金电极表面，4℃冰箱中孵育；其次，制备亚甲基蓝固化的纳米金/石墨烯/乙酰基抗体复合材料MBAuNPs@GO-Ab：将氯金酸HAuCl₄，十六烷基三甲基溴化铵CTAB与水混合，向反应混合物中加入抗坏血酸，然后加入NaOH，得到十六烷基三甲基溴化铵CTAB覆盖的纳米金AuNPs，离心、纯化后分散在等量水中，即得纳米金AuNPs溶液；再向溶液中加入氧化石墨烯GO超声分散，静置备用，即得纳米金AuNPs/氧化石墨烯复合材料AuNPs@GO溶液，随后加入乙酰基抗体孵育，最后加入亚甲基蓝MB震荡混合均匀，即得亚甲基蓝固化的纳米金/石墨烯/乙酰基抗体复合材料MBAuNPs@GO-Ab溶液；最后制备电化学法拉第笼免疫传感器：取亚甲基蓝固化的纳米金/石墨烯/乙酰基抗体复合材料溶液MBAuNPs@GO-Ab滴涂于多肽/金电极peptide/Au表面，室温下孵育，随后将制得的传感器置于磷酸缓冲溶液PBS中进行方波伏安法SWV测试；

其中磷酸缓冲溶液PBS浓度为0.1M，pH＝7.0。

2.如权利要求1所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法，其特征是，制备多肽/金电极peptide/Au的具体方法是：分别取乙酰转移酶p300与底物多肽，乙酰辅酶A在磷酸缓冲溶液PBS中充分混合，总体积10μL；将反应液置于25～35℃恒温水浴锅中孵育15～45min；取乙酰转移酶p300催化反应液3～7μL，滴涂于金电极表面，4℃冰箱中孵育4～10h；

其中，乙酰转移酶p300的浓度为50～150nM，用量1～3μL；

底物多肽的浓度为0.5～1.5mM，用量0.2～1.6μL；

乙酰辅酶A的浓度0.5～1.5mM，用量0.5～1.5μL；

磷酸缓冲溶液PBS浓度为0.1M，pH＝7.0。

3.如权利要求1所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法，其特征是，合成纳米金AuNPs溶液的具体方法是：将氯金酸HAuCl₄，十六烷基三甲基溴化铵CTAB与6.05～10.55mL水混合，向反应混合物中加入抗坏血酸，然后加入氢氧化钠；将溶液轻轻旋转10s，静置1～3h，得到十六烷基三甲基溴化铵CTAB包覆的纳米金AuNPs，7000rpm离心8～12min，纯化后分散在等量水中，即得纳米金AuNPs溶液；

其中，氯金酸HAuCl₄浓度为0.01～0.1M，用量0.025～0.25mL；

十六烷基三甲基溴化铵CTAB浓度为0.1～0.5M，用量0.2～1mL；

抗坏血酸浓度为0.05～0.5M，用量0.02～0.2mL；

氢氧化钠浓度为0.05～0.5M，用量0.02～0.2mL。

4.如权利要求3所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法，其特征是，制备纳米金/氧化石墨烯复合材料AuNPs@GO溶液的具体方法是：取0.5～5mg氧化石墨烯GO加入到0.5～5mL纳米金AuNPs溶液中，超声分散2～6h，随后静置0.5～3.5h备用，即得纳米金AuNPs/氧化石墨烯复合材料AuNPs@GO溶液。

5.如权利要求4所述的电化学法拉第笼免疫传感器的构建方法，其特征是，制备亚甲基蓝固化的纳米金/石墨烯/乙酰基抗体复合材料MBAuNPs@GO-Ab溶液的具体方法是：取AuNPs@GO溶液5～15μL，加入乙酰基抗体Ab，30～40℃下孵育2～6h，再加入亚甲基蓝MB混合震荡0.5～1.5h，即得亚甲基蓝固化的纳米金/石墨烯/乙酰基抗体复合材料MBAuNPs@GO-Ab溶液；

其中，乙酰基抗体Ab浓度为0.5×10^-3～1.5×10^-3mg/L，用量2.5～7.5μL；

亚甲基蓝MB浓度为0.05～0.2mM，用量2.5～7.5μL。