[发明专利]一种酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法

说明书

本发明公开了一种酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其涉及微生物技术领域。本发明的目的是提供一种提高生产效率，降低生产成本，减少污染机会的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法。本发明的方法包括以下步骤：酪酸梭菌菌种扩增；嗜酸乳杆菌菌种扩增；酪酸梭菌二级菌种的制备；嗜酸乳杆菌二级菌种的制备；联合培养；固体发酵。本发明利用酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌具有的共生、互生原理，使用上述两种菌都适宜的培养基，采用“二联五步多相联合发酵”技术，简化了生产工艺，减少了污染机会，打破了传统只能冷冻获取单一菌粉的工艺，大大降低了能耗，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法。

背景技术

益生菌，又名促生素、生菌剂、原生菌、微生态制剂、活菌制剂，是指“当摄入一定量时能对宿主的健康有作用的微生物活体”。益生菌主要包括乳酸菌类、双歧杆菌类、芽孢杆菌类、光合细菌类和酵母类等。

由于机体衰老、环境污染、饮食改变、滥用抗生素、放化疗等原因，往往会造成人和动物体内肠道内有益菌数量下降，导致肠道微生态失调，引起菌群易位，诱发内源感染，造成机体病变，通过外源补充益生菌，可维持肠道菌群平衡，提高机体免疫力，控制血清胆固醇，预防心血管疾病，抗肿瘤，延缓衰老从而促进健康。

酪酸梭菌又称：酪酸菌、酪酸杆菌。拉丁文：Clostridium butyricum。是人的正常肠道菌之一，严格厌氧，为革兰阳性菌。由于产生的酪酸又叫丁酸，所以也被称为丁酸梭菌，丁酸杆菌或丁酸菌。酪酸梭菌是1933年由日本千叶医科大学宫入近治博士首先发现并报告的，因此又名宫入菌。本菌存在于土壤、动物和人体的肠道中。

我国青岛东海药业有限公司创研的酪酸梭菌CGMCC0313.1活菌制剂(阿泰宁、常立宁、宝乐安、助宝康等)，于2004年获得国家食品和药品监督管理局新药证书。2005年3月，青岛东海药业公司通过了国家食品药品监督管理局的GMP认证，商业化生产酪酸梭菌胶囊、片剂和散剂，医患双方对其都有较好的评价。

嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，杆的末端呈圆形，主要存在小肠中，释放乳酸，乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，但是益菌作用比较弱。嗜酸乳杆菌在胃中存活率一般能达到80％，但是若不经包埋处理，口服嗜酸乳杆菌后，它们的活力仍是会受到影响的；而如果将它们全部包埋，又无法发挥其在胃中的有益作用。嗜酸乳杆菌在人体整个胃肠道中，从上而下调节微生态环境。乳酸杆菌和双歧杆菌等肠道有益菌群的生长增殖需要较高的营养水平，而大肠杆菌等条件致病菌对于营养的要求相对较低，在肠道内繁殖时，获得其生长的营养要求较容易。

现有的复合益生菌制剂通常是将单一的菌种纯化后，再选择合适的培养基，分别进行发酵、分离、干燥，然后再进行人工混合，不但操作繁琐复杂，而且大大增加了污染机会。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，用以解决现有操作复杂繁琐的问题，而且联合发酵培养得到的复合益生菌制剂由于培养过程中两个菌种的共生，使得两个菌种能够互相促进生长，提高生产效率，降低生产成本，减少污染机会。

为实现上述目的，本发明的技术方案为一种酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)酪酸梭菌菌种扩增：将酪酸梭菌置于扩增培养基1中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到扩增的酪酸梭菌菌种；

(2)嗜酸乳杆菌菌种扩增：将嗜酸乳杆菌置于扩增培养基2中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到扩增的嗜酸乳杆菌菌种；