[发明专利]一种酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法

权利要求书

1.一种酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(1)酪酸梭菌菌种扩增：将酪酸梭菌置于扩增培养基1中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到扩增的酪酸梭菌菌种；

(2)嗜酸乳杆菌菌种扩增：将嗜酸乳杆菌置于扩增培养基2中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到扩增的嗜酸乳杆菌菌种；

(3)酪酸梭菌二级菌种的制备：将酪酸梭菌菌种置于种子培养基1中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到酪酸梭菌一级菌种；将酪酸梭菌一级菌种置于种子培养基1中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到酪酸梭菌二级菌种；

(4)嗜酸乳杆菌二级菌种的制备：将嗜酸乳杆菌菌种置于种子培养基2中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到嗜酸乳杆菌一级菌种；将嗜酸乳杆菌一级菌种置于种子培养基2中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到嗜酸乳杆菌二级菌种；

(5)联合培养：将酪酸梭菌二级菌种和嗜酸乳杆菌二级菌种共同接种于液体共生培养基中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，得到联合培养菌种；

(6)固体发酵：将联合培养菌种接种于固体共生培养基中，在34～38℃厌氧环境下培养20～28h，即完成本发明的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的操作。

2.根据权利要求1所述的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其特征在于：所述步骤(1)中扩增培养基1的原料包括：胰蛋白胨20～25g/L，牛肉浸膏10～12g/L，酵母膏2～6g/L，葡萄糖3～5g/L，磷酸氢二钾2～3g/L，磷酸二氢钾2～4g/L，硫酸镁0.2～0.5g/L，氯化钙0.1～0.2g/L，硫酸亚铁0.8～1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.3～0.6g/L；

所述扩增培养基1的pH值为7.2～7.4。

3.根据权利要求1所述的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其特征在于：所述步骤(2)中扩增培养基2为液体乳酸细菌培养基。

4.根据权利要求1所述的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其特征在于：所述步骤(3)中种子培养基1的原料包括：胰蛋白胨20～25g/L，牛肉浸膏10～12g/L，酵母膏2～6g/L，葡萄糖3～5g/L，磷酸氢二钾2～3g/L，磷酸二氢钾2～4g/L，硫酸镁0.2～0.5g/L，氯化钙0.1～0.2g/L，硫酸亚铁0.8～1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.3～0.6g/L；

所述扩增培养基1的pH值为7.2～7.4。

5.根据权利要求1所述的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其特征在于：所述步骤(4)中种子培养基2为液体乳酸细菌培养基。

6.根据权利要求1所述的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其特征在于：所述步骤(5)中液体共生培养基的原料包括：蛋白胨10～12g/L，牛肉浸膏10～12g/L，酵母膏2～6g/L，葡萄糖15～18g/L，乙酸钠5～7g/L，吐温-80 10～12mL/L，七水硫酸锰0.01～0.02g/L，磷酸二氢钾2～4g/L，硫酸镁0.2～0.5g/L，氯化钙0.1～0.2g/L，半胱氨酸盐酸盐0.3～0.6g/L；

所述液体共生培养基的pH值为7.2～7.4。

7.根据权利要求1所述的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其特征在于：所述步骤(6)中固体共生培养基的原料按照质量份数包括：豆粕80～100份，玉米粉30～50份，山楂10～15份，红糖5～8份，甘草2～4份，磷酸二氢钾0.01～0.03份，酵母膏1.5～1.8份。

8.根据权利要求1所述的酪酸梭菌与嗜酸乳杆菌联合发酵制备复合益生菌制剂的方法，其特征在于：所述步骤(1)和步骤(2)中接种量为3g/L，所述步骤(3)和步骤(4)的接种量为10mL/L，所述步骤(5)中酪酸梭菌二级菌种和嗜酸乳杆菌二级菌种的接种量均为10mL/L，所述步骤(6)中联合培养菌种的接种量为10mL/kg。