[发明专利]一种产甜菊糖菌株的快速筛选方法

权利要求书

1.一种产甜菊糖菌株的快速筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)微生物培养：用无菌水将待测样品稀释10倍，振荡，取上清液涂布于牛肉膏蛋白胨培养基中，恒温培养至长出单菌菌落；

(2)微生物发酵：将步骤(1)培养出的单菌菌落接种至糖发酵培养基中，进行糖发酵，得到发酵液；

(3)甜菊糖标准曲线的制作：用无菌水配制甜菊糖母液，用糖发酵培养基作为稀释液对母液进行逐级稀释，得到一组甜菊糖标准品待测液；取每个甜菊糖标准品待测液3～5mL，Na₂SO₃溶液3～5mL，硫酸铈铵溶液1～3mL，混合均匀，将混合液放入50～70℃下水浴5～30min，水浴结束后冷却至15～30℃；设置荧光光谱仪的激发波长为254nm，发射波长为357nm，检测冷却后混合液的荧光强度，以甜菊糖浓度为横坐标，以荧光强度为纵坐标作甜菊糖标准曲线；

(4)微生物筛选：将步骤(2)得到的浑浊发酵液离心，取上清，过滤，获得样品液，按照步骤(3)的操作配制混合液，并测其荧光强度，将测得的荧光强度代入甜菊糖标准曲线中，获得样品液中甜菊糖的浓度，当甜菊糖的浓度大于零时，对应步骤(1)中的单菌菌落即为产甜菊糖菌株。

2.根据权利要求1所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(1)中，牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏0.2～0.4w/w％，蛋白胨0.5～1.5w/w％，氯化钠0.3～0.7w/w％，琼脂1～2.0w/w％，其余为蒸馏水；牛肉膏蛋白胨培养基的pH为7.2～7.4；培养温度为37℃，培养时间为24～72h。

3.根据权利要求1或2所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(2)中，糖发酵培养基的组成为：蛋白胨0.3～0.6w/w％，牛肉膏0.3～0.8w/w％，吐温80 0.03～0.07w/w％，糖0.8～1.2w/w％，其余为蒸馏水；培养温度为37℃，培养时间为12～48h。

4.根据权利要求1或2所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(2)中，糖发酵培养基中的糖原是葡萄糖、蔗糖或果糖。

5.根据权利要求3所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(2)中，糖发酵培养基中的糖原是葡萄糖、蔗糖或果糖。

6.根据权利要求1、2或5所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(3)中，Na₂SO₃溶液的浓度为2.0x10^-5～1.5x10^-4mol/L，硫酸铈铵溶液的浓度为5.0x10^-5～6.0x10^-4mol/L；荧光光谱仪入射、出射狭缝均为5.0nm。

7.根据权利要求3所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(3)中，Na₂SO₃溶液的浓度为2.0x10^-5～1.5x10^-4mol/L，硫酸铈铵溶液的浓度为5.0x10^-5～6.0x10^-4mol/L；荧光光谱仪入射、出射狭缝均为5.0nm。

8.根据权利要求4所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(3)中，Na₂SO₃溶液的浓度为2.0x10^-5～1.5x10^-4mol/L，硫酸铈铵溶液的浓度为5.0x10^-5～6.0x10^-4mol/L；荧光光谱仪入射、出射狭缝均为5.0nm。

9.根据权利要求1、2、5、7或8所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(4)中，的离心转速为5000～8000rpm，离心时间为10～15min，过滤时的滤膜孔径为0.22um。

10.根据权利要求6所述的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(4)中，的离心转速为5000～8000rpm，离心时间为10～15min，过滤时的滤膜孔径为0.22um。