[发明专利]一种可溶性CD38浓度的检测方法

说明书

本发明涉及一种可溶性CD38浓度的检测方法。筛选出能够同时结合CD38的单域抗体对，即单域抗体1053和551，其中单域抗体551作为捕获抗体，单域抗体1053和萤火虫萤光素酶突变体Fluc2的融合蛋白作为检测抗体。将单域抗体551包被在ELISA板底来捕获溶液中的CD38，检测抗体中的Fluc2催化萤光素的发光信号来评估CD38的浓度，开发出一种特异性超高灵敏度的可溶性CD38检测方法。

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，涉及一种可溶性CD38浓度的检测方法。

背景技术

CD38是一个单次跨膜的糖蛋白，常被用作细胞分化的标记分子。1996年，首次发现可溶性CD38(soluble CD38，sCD38)，它被认为是全长CD38分子的膜外结构域被切割释放的产物。它们存在于多种生理及病理体液和肿瘤细胞培养上清中，保留了CD38的抗原特性和催化活性¹。随后的研究发现，可溶性CD38能够作为一种信号分子，具有诱导细胞增殖和迁移²、延长记忆抗体寿命³和调节母胎耐受等⁴等功能。

CD38在多种血液癌细胞，例如多发性骨髓瘤细胞表面呈现异常高表达⁵，而在正常淋巴细胞、骨髓细胞以及一些非造血细胞上处于低表达状态。因此，CD38被认为是一个治疗多发性骨髓瘤的靶标，多个针对其的治疗性单克隆抗体正在研发过程中⁶。细胞表面CD38的表达量是多发性骨髓瘤的一个诊断指标，但是病人骨髓瘤细胞的获取需要做骨髓穿刺，具有入侵性，而且骨髓的局部抽取并不能反映病人整体骨髓瘤的负荷，所以血液诊断具有优越性。

由于病人血浆是一个复杂体系，可溶性CD38含量很低，需要高灵敏方法才能进行精确检测。目前市场上检测灵敏度最高的一款CD38检测ELISA试剂盒，采用传统抗体进行固相夹心酶联免疫吸附，其检测灵敏度标称93.75pg/mL。缺点：1)检测灵敏度仍然有限；2)检测特异性不强，不适合检测复杂样本；3)成本高，一个试剂盒5000元仅能做96个样品/测试。

参考文献

1 Funaro,A.et al.Identification and characterization of an activesoluble form of human CD38in normal and pathological fluids.Internationalimmunology 8,1643-1650(1996).

2 Deaglio,S.et al.CD38/CD31interactions activate genetic pathwaysleading to proliferation and migration in chronic lymphocytic leukemiacells.Molecular medicine 16,87-91,doi:10.2119/molmed.2009.00146(2010).

3 Liu,X.Q.,Hart,D.N.,MacPherson,G.G.,Good,M.F.&Wykes,M.N.SolubleCD38significantly prolongs the lifespan of memory B-cell responses.Immunology125,14-20,doi:10.1111/j.1365-2567.2008.02914.x(2008).

4 Kim,B.J.et al.Seminal CD38is a pivotal regulator for fetomaternaltolerance.Proceedings of the National Academy of Sciences of the UnitedStates of America 112,1559-1564,doi:10.1073/pnas.1413493112(2015).