[发明专利]一种可溶性CD38浓度的检测方法在审
| 申请号： | 201810312462.5 | 申请日： | 2018-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN108593912A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 赵永娟;李汉璋;黎婷 | 申请（专利权）人： | 北京大学深圳研究生院 |
| 主分类号： | G01N33/535 | 分类号： | G01N33/535;G01N33/68 |
| 代理公司： | 深圳市顺天达专利商标代理有限公司 44217 | 代理人： | 郭伟刚 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单域抗体 检测抗体 检测 超高灵敏度 萤火虫 捕获抗体 融合蛋白 萤光素酶 种特异性 突变体 包被 催化 捕获 发光 筛选 评估 开发 | ||
1.一种可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、使用单域抗体551作为捕获抗体，包被在ELISA板底来捕获样本溶液中的CD38；
S2、使用单域抗体1053和萤光素酶的融合蛋白作为检测抗体，特异性结合CD38；
S3、检测萤光素酶催化萤光素的发光信号来评估CD38的浓度。
2.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述萤光素酶为萤火虫萤光素酶突变体Fluc2。
3.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述单域抗体551的氨基酸序列如序列表中序列4所示，其编码基因如序列表中序列3所示。
4.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述单域抗体1053的氨基酸序列如序列表中序列2所示，其编码基因如序列表中序列1所示。
5.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述检测抗体的氨基酸序列如序列表中序列6所示，其编码基因如序列表中序列5所示。
6.根据权利要求1所述的可溶性CD38浓度的检测方法，其特征在于，所述检测抗体的表达载体，构建过程包括如下步骤：
S201、PCR扩增CD38单域抗体1053的基因序列，使用限制性内切酶KpnI和SacI酶切pRHSUL2载体和1053基因序列，并用T4 DNA连接酶连接两个片段，构建pRHSUL2-1053；
S202、使用限制性内切酶SacI和PstI酶切pRHSUL2-1053载体，含有SacI和PstI粘性末端以及2×G4S序列的两条DNA单链经退火，使用T4 DNA连接酶将2×G4S插入pRHSUL2-1053，构建pRHSUL2-1053-G4S；
S203、PCR扩增萤火虫萤光素酶突变体Fluc2的基因序列，使用限制性内切酶PstI和HindⅢ酶切pRHSUL2-1053-G4S和Fluc2基因序列，用T4 DNA连接酶连接两个片段，构建pRHSUL2-1053-G4S-Fluc2，即所述检测抗体的表达载体。
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