[发明专利]一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法

说明书

一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法，属于动物分子遗传学领域。本发明针对如何鉴定低脂肉鸡的问题，提供了一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法，步骤如下：设计并合成用于扩增TCF21基因CDS区的引物对及用于扩增TBP基因CDS区的引物对；提取待测肉鸡腹部脂肪组织总RNA并进行反转录获得cDNA；对待测肉鸡腹部脂肪组织cDNA进行荧光定量PCR；当待测肉鸡腹部脂肪组织中TCF21基因mRNA的相对表达量小于0.125时，鉴定待测肉鸡为低脂肉鸡，所述相对表达量是以TBP基因为内参计算获得的。本发明可用于低脂肉鸡的鉴定。

技术领域

本发明属于动物分子遗传学领域，特别是涉及一种利用基因表达量鉴定低脂肉鸡的方法。

背景技术

经过长期的选育，肉鸡的生长速度和产肉量得以明显提高。然而肉鸡育种却面临着新的挑战：伴随着快速生长，肉鸡生理性不适症及相关疾病明显增加，如体脂蓄积过多、腹水综合症、猝死症、腿部疾病、机体免疫功能下降等，这些问题给肉鸡生产者造成了巨大的经济损失。肉鸡体脂(尤其是腹脂)蓄积过多已成为一个突出的问题。肉仔鸡体内沉积过多的脂肪有诸多不利：(1)明显降低饲料转化效率，因为沉积单位重量的脂肪比沉积单位重量的瘦肉多消耗三倍的能量；(2)降低了胴体瘦肉对脂肪组织的比例，因而降低了分割肉产量；(3)加工者和消费者将肉仔鸡体内沉积的这些脂肪的很大一部分(腹脂垫、肌胃周围脂肪、嗉囔脂肪及肠系膜脂肪等)丢弃，这不仅增加了加工者和消费者的负担，而且增加了废物及处理水中的脂肪含量，从而污染了环境。由此看来，肉仔鸡体内沉积过多的脂肪将会给生产者、加工者和消费者造成显而易见的经济损失。肉种鸡过肥会严重影响产蛋率、受精率和孵化率，并且会诱导脂肪肝综合症(FLHS)的发生，从而加大了产蛋期的死淘率。因此，控制脂肪在鸡体内的过多蓄积，进一步提高肉鸡的饲料转化效率和胴体质量是亟待研究解决的重大问题。

鸡TCF21基因位于3号染色体上，具有两个外显子和一个内含子，共编码179个氨基酸。有研究发现，在鸡胚胎发育过程中的多种组织中均能检测到TCF21的表达；TCF21在鸡血管生成和创伤愈合过程中发挥重要作用(Soulet等，2010)；TCF21在鸡心脏发育过程中扮演关键性角色。迄今为止，没有发现TCF21基因在鸡脂肪组织生长发育过程中的功能及调控机制方面的研究报道。

发明内容

本发明针对如何鉴定低脂肉鸡的问题，提供了一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法，包括如下步骤：

(1)引物设计与合成：设计并合成用于扩增TCF21基因CDS区的引物对及用于扩增TBP基因CDS区的引物对；

(2)提取待测肉鸡腹部脂肪组织总RNA并进行反转录获得cDNA；

(3)荧光定量PCR：分别利用步骤(1)所述的引物对，以待测肉鸡腹部脂肪组织cDNA为模板进行荧光定量PCR；

(4)鉴定是否为低脂肉鸡：对步骤(3)所述实时荧光定量PCR的Ct值进行统计分析，当待测肉鸡腹部脂肪组织中TCF21基因mRNA的相对表达量小于0.125时，鉴定待测肉鸡为低脂肉鸡，所述相对表达量是以TBP基因为内参计算获得的。

优选地：

步骤(1)所述扩增TCF21基因CDS区的引物对是以鸡TCF21基因mRNA序列为模板设计的，上游引物为TCF21-F，其序列如SEQ ID No：1所示，下游引物为TCF21-R，其序列如SEQID No：2所示。

步骤(1)所述扩增TBP基因CDS区的引物对是以鸡TBP基因mRNA序列为模板设计的，上游引物为TBP-F，其序列如SEQ ID No：3所示，下游引物为TBP-R，其序列如SEQ ID No：4所示。

步骤(2)所述总RNA提取方法为Trizol法。