[发明专利]一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法

权利要求书

1.一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）引物设计与合成：设计并合成用于扩增TCF21基因CDS区的引物对及用于扩增TBP基因CDS区的引物对，其中，所述用于扩增TCF21基因CDS区的引物对是以鸡TCF21基因mRNA序列为模板设计的，上游引物为TCF21-F，其序列如SEQ ID No：1所示，下游引物为TCF21-R，其序列如SEQ ID No：2所示，所述用于扩增TBP 基因CDS区的引物对是以鸡TBP基因mRNA序列为模板设计的，上游引物为TBP-F，其序列如SEQ ID No：3所示，下游引物为TBP-R，其序列如SEQ ID No：4所示；

（2）提取待测肉鸡腹部脂肪组织总RNA并进行反转录获得cDNA；

（3）实时荧光定量PCR：分别利用步骤（1）所述的引物对，以待测肉鸡腹部脂肪组织cDNA为模板进行荧光定量PCR；

（4）鉴定是否为低脂肉鸡：对步骤（3）所述实时荧光定量PCR的Ct值进行统计分析，当待测肉鸡腹部脂肪组织中TCF21基因mRNA的相对表达量小于0.125时，鉴定待测肉鸡为低脂肉鸡，所述相对表达量是以TBP基因为内参计算获得的，具体采用2^−ΔCt方法计算，其中ΔCt =Ct_TCF21-Ct_TBP，Ct_TCF21为TCF21基因荧光定量PCR反应中荧光信号到达设定的阈值时经历的循环数，Ct_TBP为TBP基因荧光定量PCR反应中荧光信号到达设定的阈值时经历的循环数。

2.根据权利要求1所述的一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法，其特征在于，步骤（2）所述总RNA提取方法为Trizol法。

3.根据权利要求1所述的一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法，其特征在于，步骤（2）所述反转录条件为：（1）总RNA 1μg，2.5μM oligo dT引物0.5μl，再加入RNase-free水补至5μl，反应条件为：70℃ 5min，冰浴5min；（2）然后向上述体系中加入如下试剂：

5×PCR reaction buffer 4μl

10mmol/L dNTP Mixture 1μl

25mmol/L MgCl₂ 2.4μl

40U/μl RNase Inhibitor 0.5μl

Reverse Transcriptase 1μl

RNase-free ddH₂O 6.1μl

加水补至 20μl

反应条件：25℃ 5min，42℃ 60min，70℃ 15min，4℃ 保温，获得cDNA。

4.根据权利要求1所述的一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法，其特征在于，步骤（3）所述荧光定量PCR反应体系为：

FastStart Universal SYBR Green Master 5μl

10μmol/L上游引物 0.2μl

10μmol/L下游引物 0.2μl

cDNA 1μl

灭菌水 3.6μl

反应条件为：95℃预变性10min，95℃ 15s，60℃ 1min，共40个循环，每个样品设置3个重复。

5.根据权利要求1所述的一种利用TCF21基因mRNA表达量鉴定低脂肉鸡的方法，其特征在于，步骤（4）所述统计分析利用JMP软件进行。