[发明专利]人工肺泡的制备方法

权利要求书

1.人工肺泡的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1，配制浓度为3~10wt/v%的明胶溶液，采用微流控技术制备明胶微球，将明胶微球置于模具中，自组装排列粘结成型后得到明胶模板；

步骤2，将浓度为10~20wt/v%的PU的1,4-二氧六环溶液自上方滴加至明胶模板，浸透整个模板后置于-20℃冷却，冷冻干燥后除去1,4-二氧六环，得到明胶/PU复合物；

步骤3，将明胶/PU复合物置于≥45℃水浴下，搅拌溶解去除明胶微球，得到PU三维多孔反蛋白石结构支架；

步骤4，将PU三维多孔反蛋白石结构支架进行氨等离子体处理，75%酒精浸泡，干燥后置于1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基硫代琥珀酰亚胺和肝素的混合溶液中，室温下孵育，PBS清洗后，再浸泡在VEGF溶液中，4℃下孵育，得到PU-VEGF支架；

步骤5，10-40 rpm转速下，将MRC-5细胞悬液旋转接种至PU-VEGF支架上，然后将HUVECs细胞与NL20细胞悬液接种至已接种人胚肺细胞的PU-VEGF支架上，培养至少3周，得到人工肺泡。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，明胶溶液的浓度为5~10wt/v%，所述的微流控参数为：控制明胶溶液的流速为1~3 mL/h，有机相的流速为10~30 mL/h，有机相通道的直径为0.5~1mm，水相溶液通道的直径为0.16~0.5 mm，收集溶液为甲醇溶液。

3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，明胶溶液浓度为10wt/v %，所述的微流控参数为：控制明胶溶液的流速为3 mL/h，有机相的流速为18 mL/h，水相溶液通道的直径为0.3mm，有机相溶液通道的直径为0.7 mm。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述的有机相为含有3wt%司盘80的甲苯。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述的自组装步骤中，温度为60~80℃，时间为1~2h。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中，冷却时间为4~6h。

7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4中，所述的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的浓度为2 mM，N-羟基硫代琥珀酰亚胺的浓度为5 mM，肝素的浓度为1 mg/mL。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4中，所述的室温下孵育时间为2~3h，4℃下孵育时间为过夜。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5中，所述的MRC-5细胞的接种密度为10⁶~10⁷个/mL，HUVECs与NL20细胞的接种密度为10⁵个/mL。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5中，所述的旋转接种的转速为20rpm。