[发明专利]一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法在审
| 申请号： | 201810306747.8 | 申请日： | 2018-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN108588044A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 罗维晓;魏海明;王美丽;胡晓飞 | 申请（专利权）人： | 山东博科生物产业有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N9/18 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 250200 山东省济南市章丘明水*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胆固醇氧化酶 胆固醇脂酶 对氨基苯磺酸 离子物质 保护剂 乳化剂 制备 高密度脂蛋白胆固醇 离心机离心 酶法检测 配方组成 体外检测 低转速 缓冲液 激活剂 兼容性 上清液 取出 配置 | ||
1.一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法如下：
1）基本原理：以PEG20000为载体，在激活剂以及离子物质的存在的情况下，使胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶与PEG20000之间形成离子键，以获取具有对脂蛋白具有选择性的PEG修饰酶；
2)基本步骤：
首先配置缓冲液，然后加入对氨基苯磺酸和AEO-9两种物质作为激活剂，然后加入载体PEG20000（sigma），再加入保护剂以及乳化剂和离子物质搅拌均匀后，依次加入胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶，慢中速搅拌10分钟，然后使用低转速离心机离心后，取出上清液即可得到同等效果的PEG修饰酶；
3)配方组成成分：
PIEPES 100mmol/L PH=7.0
对氨基苯磺酸 5mmol/L
AEO-9 1.2g/L
PEG20000（sigma） 5G/L
保护剂 2ml/L-3ml/L
乳化剂 1ml/L-3 ml /L
离子物质 3g/L-5g/L
胆固醇氧化酶 3KU/l
胆固醇脂酶 1KU/l
MIT 0.5g/L-1g/L。
2.根据权利要求1所述的一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法，其特征在于试剂中所选择的酶结合载体为PEG20000。
3.根据权利要求1所述的一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法，其特征在于试剂R1所述PEG激活剂为对氨基苯磺酸和AEO-9。
4.根据权利要求1所述的一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法，其特征在于所述乳化剂为曲拉通-100。
5.根据权利要求1所述的一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法，其特征在于所述离子物质为氯化钠。
6.根据权利要求1所述的一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法，其特征在于所述保护剂为磷脂血清。
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