[发明专利]一种玉米大斑病高效抗病鉴定接种体及其制备方法

说明书

本发明提供一种玉米大斑病高效抗病鉴定接种体及其制备方法，接种体由以下原料组成：小麦100g、甘露醇2.0～3.0g、玉米叶10～25g，制备步骤包括：1）玉米大斑病强致病力菌株的筛选；2）玉米大斑病强致病力菌株的保存；3）二级菌种的配制；4）接种体的配制；5）接种体的培养。本发明具有以下优点：获得用于玉米大斑病抗病性鉴定的菌株为强致病力、高纯度、高活力的菌株，为玉米抗病性鉴定的准确性和高效性提供保障；工作效率比平板培养基极大提高；避免小昆虫及杂菌的感染，获得高质量接种体成品；接种体的营养及其培养条件利于玉米大斑病菌分生孢子的产生，产孢速度快、产孢量大，产孢期长。

技术领域

本发明属于植物病原真菌研究技术领域，具体涉及一种玉米大斑病高效抗病鉴定接种体及其制备方法。

背景技术

玉米大斑病（Northern Corn Leaf Blight)是玉米的一种重要叶部病害。1876年玉米大斑病在意大利首次发现，目前已成为世界性流传病害之一，在我国各地也普遍发生，大斑病的流行，造成玉米植株早衰，雌穗秃尖，普遍给玉米生产造成较大损失，严重地块产量下降30%～50%，甚至更多。目前防治该病害主要以种植抗病品种为主，科学合理品种布局，减少初侵染源，化学防治等综合技术措施。利用抗病种质资源，选育和种植抗病品种是控制玉米大斑病流行的主要有效措施，在抗病品种的选育与利用过程中,抗病性鉴定已成为玉米育种及其区域适应性的一个常规工作，而获得大量玉米大斑病菌分生孢子，或带大量分生孢子的接种体是该工作顺利进行的基础条件。

实验中通常采用高粱粒组织培养基来培养玉米大斑病分生孢子，方法为将培养基平板培养的病菌接种于经高压灭菌的高粱上，培养5～7d菌丝长满高粱粒后，用清水洗刷掉籽粒表面菌丝，转放到方盘类器具内再进行室温黑暗培养；待产孢后即可进行玉米抗病鉴定接种。该方法通常能制备的分生孢子量较少，在瓷盘中开放产孢，极易造成杂菌污染、滋长小昆虫。石妞妞，杜宜新，陈福如等人发明“一种玉米大斑病菌产孢培养基及其应用”（申请号：CN201610567969.6），用该方法培养即产生大量形态一致、成熟度一致的分生孢子。但该方法还是利用平板培养基进行产孢，其产孢、取孢操作过程繁琐，不利于大量分生孢子的获取，不便于进行大面积抗病鉴定操作，不能用带病菌培养基进行接种。

在抗病鉴定试验中，通常采用随机分离得到的玉米大斑病菌作为供试菌株，但有时采用的菌株致病力不强，对抗病鉴定效果不理想；在病菌分离过程中，常采用稀释法进行单孢分离，不能确定是否得到单细胞纯菌株。在病菌的保存中，常采用PDA培养基进行培养后保存，但因PDA培养基营养较高，病菌生长旺盛，保存后菌株的活力容易衰退。采用标记法进行单细胞分离，经致病力鉴定筛选菌株，用低营养培养基作为菌株保存基质，是保证菌株纯度、致病力及活力的保障。

因此，寻找一种无污染、分生孢子量大、致病力强、成本低且制备过程操作简单、可以用带病菌组织进行接种的接种体及其培养方法，对开展大面积玉米大斑病抗病性接种鉴定具有重要意义。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种快速、大量制备玉米大斑病高效抗病鉴定接种体及其方法。

为实现上述目的，本发明玉米大斑病高效抗病鉴定接种体，接种体由以下重量比的原料组成：小麦100g、甘露醇2.0～3.0g、玉米叶10～25g。

进一步地，所述的玉米大斑病高效抗病鉴定接种体的制备方法，步骤如下：

1）玉米大斑病强致病力菌株的筛选，先进行病菌的分离，然后用单细胞进行纯化，采用柯赫氏法则进行病菌的验证，最后通过常规菌株致病力的测定筛选出强致病力菌株；

2）玉米大斑病强致病力菌株的保存，把筛选到的强致病力菌株放入PCA斜面培养基中培养4～7d，放入4℃冰箱进行保存；

3）二级菌种的配制：活化后的菌株放入灭菌后的高粱粒培养基中在24～26℃培养6～7d，即得二级菌种；