[发明专利]一种K-ras基因突变的快速检测试剂盒在审
| 申请号： | 201810302503.2 | 申请日： | 2018-04-05 |
| 公开（公告）号： | CN110004224A | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 邓定平 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210006 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变 快速检测试剂盒 试剂盒 触发 引物 检测 分子生物学技术 检测试剂 快速检测 上游引物 突变位点 下游引物 荧光探针 灵敏度 单管 荧光 判定 敏感 | ||
1.一种K-ras基因突变的快速检测试剂盒，其特征在于，包括：用于检测10个敏感突变位点的ARMS上游引物、下游引物、触发引物、荧光探针；
所述的上游引物的序列如SEQ ID NO.1～10所示；
所述的下游引物的序列如SEQ ID NO. 11～13所示；
所述的触发引物的序列如SEQ ID NO. 14～16所示；
所述的荧光探针的序列如SEQ ID NO. 17所示。
2.根据权利要求1所述的K-ras基因突变的快速检测试剂盒，其特征在于，还包括淬灭探针，序列如SEQ ID NO. 18所示。
3.根据权利要求1所述的K-ras基因突变的快速检测试剂盒，其特征在于，荧光探针的5’端被FAM修饰。
4.根据权利要求2所述的K-ras基因突变的快速检测试剂盒，其特征在于，淬灭探针的5’端被BHQ修饰。
5.根据权利要求1所述的K-ras基因突变的快速检测试剂盒，其特征在于，还包括有阻滞引物，序列如SEQ ID NO. 19～21所示。
6.根据权利要求5所述的K-ras基因突变的快速检测试剂盒，其特征在于，阻滞引物的3’ 末端进行双脱氧碱基修饰，5’末端进行去磷酸化修饰。
7.根据权利要求1所述的K-ras基因突变的快速检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的组成是：10x 缓冲液 2.5μl、Mg2+3.5μl、dNTP2.5μl、上游引物1.2μl、下游引物1.2μl、荧光探针0.5μl、Taq酶0.2μl、样本DNA 3μl 、ddH2O补足至25μl。
8.一种K-ras基因突变的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
提取样本DNA，采用权利要求1～7任一项所述的试剂盒进行荧光PCR反应，收集荧光；根据样本的荧光曲线与标准品的荧光曲线对比，判断样本是否存在突变。
9.根据权利要求8所述的K-ras基因突变的快速检测方法，其特征在于，PCR反应程序为：95℃ 5分钟；40个循环：95℃ 15秒，60℃ 45秒。
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