[发明专利]一种抗氯丙那林单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种抗氯丙那林单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明的方法是：氯丙那林完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化后，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠。第一次免疫用完全弗氏佐剂，之后都用不完全弗氏佐剂。将高效价低IC50的小鼠的脾细胞通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争ELISA筛选和三次亚克隆，得到一株杂交瘤细胞株。此细胞株分泌的单克隆抗体，对氯丙那林具有较好的特异性和检测灵敏度，IC₅₀值为0.435ng/ml，可以用于食品中氯丙那林的残留检测。

技术领域

本发明涉及一种抗氯丙那林单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫学检测领域。

背景技术

β₂-受体激动剂(β₂-agonist)能明显促进动物体内蛋白质的合成和脂肪的分解，所以常被当作动物饲料添加剂使用来达到提高饲养动物瘦肉率的目的。但β₂-受体激动剂在动物体内代谢缓慢且具有蓄积毒性，动物可食性部分通过食物链进入人体，进而对人类的健康带来危害。氯丙那林的化学名为1-(2-氯苯基)-2-异丙基氨基-乙醇，也是一种β₂-受体激动剂，在临床上常用来治疗哮喘类病症。但是当达到一定剂量，它和其它β₂-受体激动剂一样在动物体内具有营养再分配作用，可能会被用作一种新型的动物促生长剂。因为公众关注少，所以在例行检测中常被忽略，给动物性食品安全带来潜在的威胁。早在2007年，通过液质联用仪发现了食用畜产品中氯丙那林的残留，并提出“新型瘦肉精”的概念。另外，2013年我国破获的首例兽药非法添加“瘦肉精”案件中，罪魁祸首也是盐酸氯丙那林，它被添加在“30％替米考星注射液”等6种治疗动物感冒的兽药中，造成氯丙那林在动物体内残留。

目前检测氯丙那林的方法主要是液相色谱法(HPLC)，液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)，酶联免疫吸附法，免疫亲和色谱柱和电化学传感器等方法，但是这些方法存在操作繁琐，耗时，费用比较贵等缺点，不能实现大量样品的快速检测，因此建立一种快速简便的检测方法具有重要意义。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测。然而得到高特异性和高特异性的单克隆单体是免疫学检测的前提，其中人工抗原的合成是其中重要的一步。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种抗氯丙那林单克隆抗体杂交瘤细胞株，分类命名为单克隆细胞株，已于2017年9 月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14689，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明的第二个目的是提供由杂交瘤细胞CGMCC No.14689分泌的单克隆抗体。

本发明的第三个目的是提供所述单克隆抗体的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述应用是用于制备检测氯丙那林的试剂盒。

本发明的第四个目的是提供一种氯丙那林检测试剂盒，所述试剂盒含有所述单克隆抗体，包被于固相载体上的抗原，能与检测抗原结合的酶标抗体，显色底物，洗涤液和封闭液；所述抗原为氯丙那林包被原，所述抗体为杂交瘤细胞CGMCC No.14689分泌的单克隆抗体。

本发明的第五个目的是提供一种氯丙那林的检测方法，所述方法包括：含有包被抗原的固相载体的制备，孵育和检测；所述含有包被抗原的固相载体的制备是合成的氯丙那林包被原包被至固相载体上；孵育是将所述单克隆抗体与待测样品充分结合，再加入酶标抗体；所述检测是加入显色底物，检测OD₄₅₀下的吸光值。

本发明的第六个目的是提供所述单克隆抗体杂交瘤细胞的制备方法，所述方法包括(1) 半抗原合成、免疫原合成、小鼠免疫、细胞融合和阳性克隆的筛选及鉴定。