[发明专利]一种心脑双靶向脂质体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种心脑双靶向脂质体，其特征在于，所述的心脑双靶向脂质体是通过在式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共轭物修饰的脂质体的表面偶联Anti-cTnI蛋白抗体或其片段后得到的；

其中，n＝10～120。

2.如权利要求1所述的心脑双靶向脂质体，其特征在于，n＝13～45。

3.如权利要求1所述的心脑双靶向脂质体，其特征在于，所述的聚乙二醇为聚乙二醇600、聚乙二醇1000或聚乙二醇2000。

4.如权利要求1所述的心脑双靶向脂质体，其特征在于，式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共轭物通过以下步骤制备得到：在二氯甲烷中将p-(戊二酸酰氨)苯基-α-D-乙酰甘露糖(Ac₄MAN-COOH)和聚乙二醇(PEG)通过缩合反应形成PEG-Ac₄MAN，然后将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)与PEG-Ac₄MAN进行偶联，得到DSPE-PEG-Ac₄MAN，即为式I所示的化合物。

5.如权利要求4所述的心脑双靶向脂质体，其特征在于，式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共轭物通过以下步骤制备得到：将叠氮-聚乙二醇-戊二酸酰氨溶于四氢呋喃中，之后加入Pd/c和乙酸，于室温下通入氢气，反应一夜；将粗品过滤后，旋转蒸发至干燥，然后溶于二氯甲烷中，加入三乙胺和p-(戊二酸酰氨)苯基-α-D-乙酰甘露糖(Ac₄MAN-COOH)，在室温下反应一夜，分离纯化，得到PEG-Ac₄MAN；将PEG-Ac₄MAN溶于二氯甲烷中，依次加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDCI)，室温反应过夜，分离纯化，得到丁二酰亚胺聚乙二醇乙酰甘露糖苷；将丁二酰亚胺聚乙二醇乙酰甘露糖苷溶于二氯甲烷中，加入TEA和溶于氯仿中的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)，在室温下反应一夜，用饱和NaCl萃取2次，分离纯化，得到DSPE-PEG-Ac₄MAN，即为式I所示的化合物。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述的心脑双靶向脂质体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共轭物修饰的脂质体的制备

将蛋黄磷脂酰胆碱(EPC)、胆固醇(CHO)和式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共轭物用无水乙醇溶解在旋转瓶中，通过在减压条件下蒸发该混合物形成薄的脂质膜；用生理盐水溶液水化该脂质膜；通过超声处理使脂质体溶液分散，并通过聚碳酸酯膜挤出，得到乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共轭物修饰的脂质体，命名为Ac₄MAN-PEG-LIP，将脂质体样品保存在4℃，备用；

(2)Anti-cTnI抗体修饰的脂质体制备

合成Anti-cTnIAb-DSPE-PEG溶液：将Anti-cTnI抗体和DSPE-PEG-马来酰亚胺分别溶于HEPES溶液中，然后混合，在4℃下过夜，得到Anti-cTnI Ab-DSPE-PEG溶液，将Anti-cTnIAb-DSPE-PEG溶液与步骤(1)制备的Ac₄MAN-PEG-LIP脂质体溶液在37℃温育2小时，制备得到Anti-cTnI抗体修饰的Ac₄MAN-PEG-LIP，命名为Anti-cTnI-PEG/Ac₄MAN-PEG-LIP，即为心脑双靶向脂质体。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中EPC，CHO和式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共轭物的摩尔比为(40-49)：(50-55)：(1-5)。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)中EPC，CHO和式I所示的乙酰化糖酯-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺共轭物的摩尔比为49：50：1。