[发明专利]天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法在审
| 申请号： | 201810295262.3 | 申请日： | 2018-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN108465125A | 公开（公告）日： | 2018-08-31 |
| 发明（设计）人： | 林贤丰;王晟毓;范顺武 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | A61L27/36 | 分类号： | A61L27/36 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 忻明年 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肌腱 复合 天然组织 肌肉 脱细胞 制备 蛋白酶抑制剂 细胞外基质 分层结构 肌肉损伤 肌肉组织 快速稳定 力学性能 免疫原性 去细胞化 哺乳动物 天然的 可用 退变 病因 细胞 修复 保留 疾病 损害 | ||
1.天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：
(1)取宰杀12h以内任意哺乳动物的肌腱复合肌肉组织，用剪刀除去肌肉以及肌腱上的脂肪，用含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液漂洗3次，每次30min，去除血液，贴附的脂肪碎片和其他杂质；
(2)在含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中，在4℃温度下用摇床100rpm震荡24-48小时；然后用液氮冻融3个循环；
(3)在KCL的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡2-12小时；
(4)在KI的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡2-12小时；
(5)在含Triton X的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡24-48小时；
(6)在含SDS的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡24-48小时；
(7)在含DNA酶的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在37℃温度下用摇床120rpm震荡12-24小时；
步骤(2)-(7)中，每个步骤完成后均用生理盐水冲洗8小时。
2.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中蛋白酶抑制剂浓度为10-50K IU/ml。
3.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的含KCL的PBS缓冲液为浓度0.1M-1M的KCL的PBS缓冲液。
4.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的含KI的PBS缓冲液为浓度1M-1.5M的KI的PBS缓冲液。
5.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的含Triton X的PBS缓冲液为浓度0.05％-2％的Triton X-100或Triton X-200的PBS缓冲液。
6.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的含SDS的PBS缓冲液为浓度0.02％-0.25％的SDS的PBS缓冲液。
7.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的含DNA酶的PBS缓冲液为浓度为1-2mg/mL DNA酶PBS缓冲液。
8.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的混合抗菌液中青霉素和链霉素的浓度分别为20K IU/ml，20g/ml；青霉素和链霉素的体积比例为1：1，加入的混合抗菌液与原溶液体积比为1：1。
9.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的液氮冻融3个循环中循环的温度为从-80℃～37℃。
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