[发明专利]一种检测BRCA1/2突变的探针库、检测方法和试剂盒

说明书

本发明提供一种检测BRCA1/2基因突变的探针及检测方法，所述DNA探针库包括一个或多个能够与BRCA1/2基因进行杂交的DNA探针。所述DNA探针可以如SEQ ID NO.1～162所示。此外，本发明提供利用该探针库对BRCA1/2基因进行富集及检测的方法，采用此方法与下一代测序技术（NGS）相结合可以极大地提高对BRCA1/2基因检测的覆盖率、准确性。

技术领域

本发明涉及一种检测BRCA1/2突变的探针库、检测方法和试剂盒，属于基因测序技术领域。

背景技术

BRCAl和BRCA2基因同为抑癌基因，参与DNA修复，维护基因组的完整。它们已经被证实是乳腺癌遗传易感基因，与家族性乳腺癌密切相关，其基因突变可以常染色体显性遗传方式传递给子代。携带着BRCA1/BRCA2基因突变的人其一生中患乳腺癌，卵巢癌危险显著增加，到70岁时发生乳腺癌的预测累积风险可达到大约80%；同时容易早年发病。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其中家族聚集性病例约占5～10%。对BRCA基因进行检测，寻找其致病突变位点，可帮助筛选出高危人群，有助于风险评估和早期诊断；同时也可为未来的高危人群基因筛查和基因诊断提供基本突变谱资料和检测策略。

由于BRCA1和BRCA2基因的突变对家族性乳腺癌、卵巢癌的发生有一定的联系，所以检测BRCA1和BRCA2的突变基因对相关癌症的诊断、预防和治疗有重要的临床意义。另外，由于BRCA1和BRCA2的突变众多，检测这些突变对于相关基因的研究十分有意义，例如对于基因多态性分析和家族进化史研究。

目前，Sanger测序技术作为主要的基因测序工具,对生命科学做出了巨大贡献。目前它仍在PCR产物、质粒、细菌人工染色体的末端检测、基因分型方面发挥重要作用。随着对人类基因组测序的需求越来越高，面对大量的DNA信息需要更为高效、高通量、低成本的DNA测序技术，而Sanger测序仪，如目前应用广泛的3730xlDNA测序仪，由于对电泳分离技术的依赖,很难进一步提升分离速度，难以实现微型化反应,因此已经无法大幅度降低测序费用和提高检测通量。

也有已公开专利使用PCR方法来检测乳腺癌易感基因突变，例如专利“检测乳腺癌易感基因突变的多重PCR试剂盒及其制备方法”(CN101200766A)。但是，该专利所用的多重PCR仅限定在BRCA1和BRCA2基因部分外显子上的部分突变位点上，而这明显不能覆盖BRCA1和BRCA2基因遍布在多个外显子上的上百种突变，因此该专利在使用上有较大局限。

发明内容

本发明的目的是：提供一种用于检测BRCA1/2基因序列的探针库，利用本发明的探针库可以较好地与BRCA1/2基因进行杂交捕获，应用于二代测序过程中，能够具有高覆盖率、测序深度均一性好的优点。

本发明的第一个方面：

一种检测BRCA1/2基因突变的探针库，其中包括有核苷酸序列如SEQ ID NO. 1～162所示的任意一条探针，或者与其具有相同功能的探针。

优选的：探针库中包括上述的全部探针。

优选的：所述的具有相同功能的探针，是指将SEQ ID NO. 1～162任意一条探针经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同杂交捕获功能的探针。

优选的：所述的具有相同功能的探针与原探针具有80%以上相同的碱基，更优选是90%以上相同碱基，再优选是95%以上相同碱基。

本发明的第二个方面：

本发明提供一种富集BRCA1/2基因片段的方法，所述方法包括以下步骤：

1）获得受试者的DNA样本库；

2）获得所述的检测BRCA1/2基因突变的探针；

3）使所述DNA探针库与所述DNA样本库进行杂交；和