[发明专利]缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法

权利要求书

1.缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

(1)取12h以内宰杀的任意哺乳动物的骨骼肌肉组织，用剪刀除去肌肉上的脂肪，用含蛋白酶抑制剂的生理盐水漂洗3次，每次20min，去除血液，贴附的脂肪碎片和其他杂质。

(2)在含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中，在4℃温度下用摇床100rpm震荡24-48小时；然后用液氮冻融3个循环；

(3)在KCL的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡2-12小时；

(4)在含Triton X的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡8-24小时；

(5)在含NaCL的PBS缓冲液中，在4℃温度下用摇床100rpm震荡2-12小时；

(6)在含SDS的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，在4℃温度下用摇床100rpm震荡8-24小时；

(7)在含DNA酶的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，37℃摇床100rpm震荡6-12小时；

步骤(2)-(7)中，每个步骤完成后均用生理盐水冲洗5小时。

2.根据权利要求1所述的缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在：所述的含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中蛋白酶抑制剂浓度为10-50K IU/ml。

3.根据权利要求1所述的缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在：所述的含KCL的PBS缓冲液为浓度0.1M-1.2M的KCL的PBS缓冲液。

4.根据权利要求1所述的缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在：所述的含Triton X的PBS缓冲液为体积浓度0.05％-1％的Triton X-100或Triton X-200的PBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在：所述的含NaCL的PBS缓冲液为体积浓度0.1M-1.5M的NaCL的PBS缓冲液。

6.根据权利要求1所述的缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在：所述的含SDS的PBS缓冲液为体积浓度0.02％-0.15％的SDS的PBS缓冲液。

7.根据权利要求1所述的缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在：含DNA酶的PBS缓冲液为浓度1-2mg/ml的DNA酶PBS缓冲液。

8.根据权利要求1所述的缓释IGF-1生长因子的肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在：步骤(2)-(7)中加入的混合抗菌液中青霉素和链霉素的浓度分别为20K IU/ml，20g/ml；青霉素和链霉素的体积比例为1：1，加入的混合抗菌液与PBS缓冲液体积比为1：1。

9.根据权利要求1所述的天然组织来源的肌腱复合肌肉脱细胞材料的制备方法，其特征在于：所述的液氮冻融3个循环中循环的温度为从-80℃～37℃。