[发明专利]利用突变蛋白检测β-内酰胺类抗生素残留的方法

权利要求书

1.一种识别β-内酰胺类抗生素残留的突变蛋白，其特征在于：该突变蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种识别β-内酰胺类抗生素残留的突变蛋白，其特征在于：该突变蛋白的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一种表达识别β-内酰胺类抗生素的突变蛋白BlaR-CTD的大肠杆菌，所述的大肠杆菌保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2018132。

4.权利要求3所述的大肠杆菌，它是由质粒pET-28a(+)-BlaR-CTD-I188K-S19C-G24C转化大肠杆菌BL21感受态细胞所得。

5.一种利用权利要求1所述的突变蛋白检测β-内酰胺类抗生素残留的方法，所述方法包括：构建突变蛋白表达质粒，对突变蛋白进行诱导表达及纯化，建立β-内酰胺类抗生素检测方法和利用突变蛋白检测β-内酰胺类抗生素，其特征还包括如下步骤：

（1）以原核表达载体pET-28a(+)-BlaR-CTD为模板，用SEQ ID NO:3-8所示的引物进行PCR扩增得到突变质粒，转化大肠杆菌BL21感受态细胞，得到保藏号为CCTCC NO:M2018132的大肠杆菌突变菌KCC；

（2）当大肠杆菌突变菌KCC的OD₆₀₀为0.6时，加入终浓度为1 mM的IPTG，18℃恒温振荡培养12 h，收集菌液后超声破碎，取上清进行纯化得到高纯度的突变蛋白I188K-S19C-G24C，其蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示；

（3）将高纯度突变蛋白I188K-S19C-G24C包被于酶标板，优化反应条件后进行检测，考察方法的精密度、灵敏度及特异性；

（4）将步骤（3）建立的检测方法应用于样品中β-内酰胺类抗生素的检测，测定最低检测限、样品回收率及变异系数，考察方法的准确度和重复性。

6.权利要求1所述的一种识别β-内酰胺类抗生素残留的突变蛋白在检测β-内酰胺类抗生素中的应用。

7.权利要求5所述的方法在可食性动物产品中β-内酰胺类抗生素残留检测中的应用。