[发明专利]甲鱼小分子多肽

说明书

本发明公开了甲鱼小分子多肽及其制备方法，包括：预处理、发酵、酶解、分离，首先将甲鱼预处理并脱脂后配得发酵基质，然后接种入米曲霉与酿酒酵母，加入发酵增效剂进行发酵培养，在发酵液中加入中性蛋白酶进行酶解，将酶解液超滤后经柱层析，分管收集洗脱峰干燥即得甲鱼小分子多肽。有益效果为：甲鱼小分子多肽具有较强的抑瘤作用，可以作为增强剂配合抑瘤制剂使用，其制备工艺简洁，甲鱼蛋白的发酵与酶解效率较高，可以节省大量的能量与时间成本。

技术领域

本发明涉及甲鱼的深加工领域，尤其是涉及甲鱼小分子多肽。

技术背景

甲鱼（AmydaSincnsis），是鳖的俗称，也叫团鱼、水鱼、是卵生两栖爬行动物，是龟鳖目鳖科软壳水生龟的统称。共有20多种。中国现存主要有中华鳖、山瑞鳖、斑鳖、鼋，其中以中华鳖最为常见。甲鱼不仅是餐桌上的美味佳肴，上等筵席的优质材料，还可作为中药材料入药。其具有诸多滋补药用功效，有清热养阴，平肝熄风，软坚散结，对肝硬化，肝脾肿大，小儿惊痫等作用。

甲鱼富含动物胶、角蛋白、铜、维生素D等营养素，能够增强身体的抗病能力及调节人体的内分泌功能，也是提高母乳质量、增强婴儿的免疫力及智力的滋补佳品。甲鱼的腹板称为“龟板”，是名贵的中药，有滋阴降火之功效。用于治疗头晕、目眩、虚热、盗汗等疾患。还对头颅外伤(例如新生儿头颅血肿等)遗留下来的顽固性头痛有很好的疗效。龟板胶是大分子胶原蛋白质，含有皮肤所需要的各种氨基酸，有养颜护肤、美容健身之效。

发明内容

本发明的目的在于提供甲鱼小分子多肽，甲鱼小分子多肽具有较强的抑瘤作用，可以作为增强剂配合抑瘤剂使用，制备工艺简洁，甲鱼蛋白的发酵与酶解效率较高，可以节省大量的能量与时间成本，甲鱼小分子多肽分成四段分子量区间，既避免了发酵液中活性多肽的浪费，还有利于对其精细化、区别化地进一步研究。

本发明方法中所使用的微生物及其所购买企业为：米曲霉，保定微农生物科技有限公司；酿酒酵母菌，烟台曼森商贸有限公司。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：甲鱼小分子多肽，其制备方法包括：预处理、发酵、酶解、分离，具体包括以下步骤：

预处理：取新鲜的甲鱼，清洗干净后低温处死，去壳去内脏取甲鱼肉置于高速匀浆机匀浆，按照肉液比1:5～7的比例与异丙醇混合均匀，在25～28℃温度下反应3～5h，过滤，在4500～5000r/min转速下离心20～30min，晾干粉碎即得脱脂粉，以蒸馏水稀释脱脂粉至质量分数为25～33%，调节pH值至6.8～7.0，在121～122℃温度下灭菌12～15min即得发酵基质；经脱脂处理后，甲鱼蛋白的含量增高，无用的脂肪等杂质被清除，既提高了发酵效率，又避免了脂肪对发酵菌的影响；

发酵：取发酵基质干重3.5～4.0%的米曲霉种子液、2.0～3.0%的酿酒酵母菌种子液接种入发酵基质中，另外再加入种子液重量0.3～1.0%的发酵增效剂，在120～160r/min转速、28～30℃温度条件下发酵培养48～60h；发酵结束后，将发酵液煮沸8～10min灭酶，11000～12000r/min离心15～30min，上清液过0.2～0.25μｍ微孔滤膜，滤液即为发酵液；在此发酵条件下，甲鱼蛋白回收率可达85%以上，蛋白质被酶解为蛋白质片段，变成了易于吸收、溶解性好、乳化性好、具有多种生理活性的发酵液，改善了蛋白质的功能特性，提高了蛋白质的营养及利用价值；利用混合菌发酵可以发挥多种菌种间的协同作用，降低单菌发酵的劣势，菌种间可能产生共生作用，代谢产物发生互补效应，能够克服中间产物过多对抗菌肽生成的不利因素，制备活性多肽的成本更低，发酵反应较温和，发酵过程易控；