[发明专利]甲鱼小分子多肽

权利要求书

1.甲鱼小分子多肽，其特征在于：所述甲鱼小分子多肽的制备方法包括：

预处理：取新鲜的甲鱼，清洗干净后低温处死，去壳去内脏取甲鱼肉置于高速匀浆机匀浆，经脱脂操作后得到脱脂粉，以蒸馏水稀释脱脂粉至质量分数为25～33%，调节pH值至6.8～7.0，灭菌即得发酵基质；

发酵：取发酵基质干重3.5～4.0%的米曲霉、2.0～3.0%的酿酒酵母菌接种，加入种子液重量0.3～1.0%的发酵增效剂发酵；灭酶后离心，取上清液过0.2～0.25μｍ微孔滤膜，滤液即为发酵液；

酶解：将发酵液低温调整至含水量为70～75%，添加2500～3300U/g中性蛋白酶，再加入(R)-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛，微波辅助酶解，酶解结束后灭酶得酶解液；

分离：在0.25～0.28MPa压力下，将酶解液依次用透过分子质量为5KDa、3KDa与1KDa的超滤膜超滤，得到四段不同分子量区间的多肽，经柱层析分离后取洗脱峰分管收集并干燥即得甲鱼小分子多肽。

2.根据权利要求1所述的甲鱼小分子多肽，其特征在于：所述预处理步骤中的脱脂操作为：将甲鱼匀浆按照肉液比1:5～7的比例与异丙醇混合均匀，在25～28℃温度下反应3～5h，过滤、离心、晾干粉碎即得脱脂粉。

3.根据权利要求1所述的甲鱼小分子多肽，其特征在于：所述发酵步骤中，发酵增效剂包含下列含量的物质：65～80%尿素、2～6%α-萘乙酸钠、15～20%氧化钙、3～7%硫酸镁、1～5%磷酸二甲酯，总和为100%。

4.根据权利要求1所述的甲鱼小分子多肽，其特征在于：所述发酵步骤中，发酵摇床转速为120～160r/min，发酵温度为28～30℃，发酵时间为48～60h。

5.根据权利要求1所述的甲鱼小分子多肽，其特征在于：所述酶解步骤中，微波功率为260～300W，间歇微波时间为5～8min。

6.根据权利要求1所述的甲鱼小分子多肽，其特征在于：所述酶解步骤中，(R)-1,1’-联萘-2,2’-酚基二异丙氧钛的添加量为中性蛋白酶重量的3.5～4.6‰。

7.根据权利要求1所述的甲鱼小分子多肽，其特征在于：所述酶解步骤中，酶解温度为53～55℃，酶解pH值为7.3～7.5，酶解时间为1.5～2.0h。

8.根据权利要求1所述的甲鱼小分子多肽，其特征在于：所述分离步骤中，柱层析操作为：用蒸馏水平衡后装柱（16mm×500mm），上样质量浓度2～3mg/mL，上样量2mL，洗脱液为蒸馏水，流速20～25mL/h，在220nm处检测，收集洗脱峰。