[发明专利]山茱萸提取物同时制备高纯度莫诺苷和马钱子苷的方法

说明书

本发明涉及一种山茱萸提取物同时制备高纯度莫诺苷和马钱子苷的方法。山茱萸提取物经大孔吸附树脂富集和正相硅胶初步分离后，再经中压反相硅胶色谱柱，流动相为乙醇和水，进行梯度洗脱，合并相同组分，减压浓缩分别得到纯度≧90％莫诺苷粗品和马钱子苷粗品；再分别经Sephadex LH‑20凝胶柱进行纯化，采用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，合并相同组分，减压蒸干得到高纯度的莫诺苷和马钱子苷。本方法操作简单易行，条件温和，适合用山茱萸提取物同时规模化制备和生产纯度≧98％的莫诺苷和马钱子苷。

技术领域

本发明涉及一种山茱萸提取物同时制备高纯度莫诺苷和马钱子苷的方法，尤其涉及一种对莫诺苷和马钱子苷有显著分离效果的中压反相硅胶柱色谱结合Sephadex LH-20(羟丙基葡聚糖凝胶)凝胶柱色谱制备高纯度目标化合物的分离方法。

背景技术

山茱萸为山茱萸科山茱萸属植物Cornus officinalis Sieb.Et Zucc.，其药用部位为干燥成熟果肉，具有补益肝肾、收涩固脱的功效，用于治疗眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、内热消渴等，应用十分广泛。山茱萸中有多种化学成分，环烯醚萜苷类成分是其最主要的活性成分，而莫诺苷和马钱子苷是环烯醚萜总苷中含量最大的两种成分，也是最主要的活性成分，在心血管保护、神经保护、抗肿瘤等方面具有较好的作用。寻找简单易行的从山茱萸中同时制备高纯度活性单体化合物的方法，将对山茱萸的开发利用奠定很好的基础。

从山茱萸中同时制备莫诺苷和马钱子苷的方法较少，专利CN 102477053A中报道采用高速逆流色谱同时分离莫诺苷和马钱子苷，此方法需要特殊的设备，成本较高，不适合大量制备产物，同时采用重结晶的方式纯化，费时费力，且能拿到高纯度目标化合物的量也很有限；“山茱萸中马钱子苷和莫诺苷对照品的制备”(李小娜，山茱萸中马钱子苷和莫诺苷对照品的制备.中草药,2006,37(8):1168-1170.)中报道，采用水浸泡，煎煮提取，醇沉淀，大孔树脂富集，正向硅胶柱除杂，高效液相制备的方式同时制备莫诺苷和马钱子苷，此方法采用高效液相纯化，需要高成本设备和色谱柱，且一次只能制备少量样品，耗费时间长，只适合实验室小量制备，不适合工业化生产使用。

发明内容

本发明的目的在于针对现有制备方法和技术中，克服同时制备纯化莫诺苷和马钱子苷存在的不足，提出一种制备方法简单、容易操作，得率高且适合规模化生产同时制备高纯度莫诺苷和马钱子苷的方法。本发明的方法简单易行，且可以同时大量制备得到纯度≧98％(质量％，以下相同)的莫诺苷和马钱子苷。

一种山茱萸提取物同时制备高纯度莫诺苷和马钱子苷的方法，山茱萸提取物经大孔吸附树脂富集和正相硅胶初步分离后，还包括以下步骤：

(1)中压反相硅胶柱分离：将经大孔吸附树脂富集和正相硅胶初步分离得到的含莫诺苷和马钱子苷的混合样品用水溶解，经中压反相硅胶色谱柱，流动相为乙醇和水，进行梯度洗脱，分别收集富含莫诺苷和马钱子苷的洗脱液，减压浓缩得到纯度≧90％莫诺苷粗品和马钱子苷粗品；

(2)凝胶柱纯化：纯度≧90％的莫诺苷和马钱子苷粗品分别经Sephadex LH-20凝胶(羟丙基葡聚糖凝胶)柱进行纯化，采用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，洗脱液减压蒸干得到高纯度的莫诺苷和马钱子苷。

步骤(1)中，中压反相硅胶分离采用仪器为中压色谱仪，压力在0-50MPa之间，使用时压力在5-25MPa之间；用中压反相硅胶柱色谱分离，柱层析为反相硅胶柱，所用反相硅胶填料为C18填料。