[发明专利]牡蛎蛋白高F值寡肽以及其制备方法在审
申请号: | 201810284429.6 | 申请日: | 2018-04-02 |
公开(公告)号: | CN108218975A | 公开(公告)日: | 2018-06-29 |
发明(设计)人: | 王一飞;陈海佳;葛啸虎;王小燕 | 申请(专利权)人: | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
主分类号: | C07K14/435 | 分类号: | C07K14/435;C07K1/16;C12P21/06 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 欧阳柏乐 |
地址: | 510000 广东省广州市广州开发*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 高F值寡肽 牡蛎蛋白 肽段 制备 | ||
1.一种牡蛎蛋白高F值寡肽,其特征在于,所述牡蛎蛋白高F值寡肽包含若干如下肽段:
肽段M1的序列为SEQ ID NO.1:Ser-His-Cys-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Tyr;
肽段M2的序列为SEQ ID NO.2:Leu-Leu-Cys-Thr-Gly-Ala-Gln。
2.一种牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于,包括下述步骤:
前处理:将牡蛎去壳,清洗牡蛎肉去泥沙,捣碎,脱脂;
水解:将脱脂后牡蛎肉按1:1-1:1.5加入蒸馏水中,并添加蛋白酶在pH7.0-8.0条件下水解,所述蛋白酶与所述牡蛎肉的比例为800U/g-1200U/g,然后灭酶活,过滤得到滤液;
蒙脱石动态脱芳:将蒙脱石装入层析柱中,所述滤液流经装有蒙脱石的层析柱,然后干燥制得寡肽粉末A;
凝胶层析,干燥得寡肽粉末B;
高效液相色谱纯化:取乙腈和超纯水作为洗脱液进行梯度洗脱,收集洗脱液,干燥,制得牡蛎蛋白高F值寡肽。
3.根据权利要求2所述的牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述蒙脱石为颗粒状蒙脱石,蒙脱石粒径为150目-250目。
4.根据权利要求2所述的牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述滤液在所述层析柱的流速为0.6mL/min-1.2mL/min。
5.根据权利要求2所述的牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述蒙脱石中掺杂纳米氧化锌或纳米氧化锰中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于,按重量份计,所述纳米氧化锌的加入量为0.6%-1.0%、所述纳米氧化锰的加入量为2.0%-4.0%。
7.根据权利要求2所述的牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于:所述的凝胶层析中选用洗脱液为超纯水,流速为0.32-0.45mL/min,每1.8
-2.2min收集1管。
8.根据权利要求2所述的牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述高效液相色谱纯化的条件为:采用梯度洗脱,洗脱时间、洗脱液成份及其百分比和流速依次为:0-10min,乙腈30%,超纯水70%,流速为0.32-0.42mL/min;10-20min,乙腈80%,超纯水20%,流速为0.45-0.62mL/min;20-35min,乙腈100%,流速为0.55-0.72mL/min;35-50min,乙腈20%,超纯水80%,流速0.54-0.71mL/min。
9.根据权利要求2所述的牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述蛋白酶为胰蛋白酶和风味蛋白酶,其中所述胰蛋白酶与所述风味蛋白酶摩尔比为1:1-1:4。
10.根据权利要求2所述的牡蛎蛋白高F值寡肽的制备方法,其特征在于,所述干燥为冷冻干燥。
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