[发明专利]一种双抗夹心法酶免疫层析检测试剂盒及制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种试剂盒包括酶免疫层析检测试纸条、样品处理液、缓冲液和缓冲液供应单元，缓冲液包含磷酸盐缓冲液、大分子蛋白、Tween‑20和防腐剂以及过氧化氢脲、过氧化氢尿素、双氧水中的任一种；酶免疫层析检测试纸条包括底物垫，其上吸附有经底物垫稀释液稀释后干燥而成的酶底物，底物垫稀释液包括无水乙醇、pH7.40.1M PBS溶液以及0.5％～4％W/V PEG6000或PEG4000；酶免疫层析检测试纸条包括酶标垫，其上吸附有经酶标抗体稀释液稀释后干燥而成酶标抗体，酶标抗体稀释液包括pH7.4 0.1M PBS溶液、以及0.5％V/V PEG4000、PEG6000或PEG8000中的任一种；酶免疫层析检测试纸条包括检测线和质控线，检测线上固定有经固定抗体稀释液稀释的固定抗体，所述固定抗体稀释液包括pH7.4 0.1M PBS溶液、0.5％V/V海藻糖、0.1％V/V Tween‑20。

技术领域

本发明涉及一种双抗夹心法酶免疫层析检测试剂盒及其制备方法与应用，属于生物检测领域。

背景技术

目前，在生物检测领域利用双抗体夹心检测抗原较为常见，其中，有通过酶标记或酶标记后层析的方式建立的检测方法，如张立怀等文献(张立怀等，检测禽流感病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立.中国医药生物技术,2009,4(1)：62-64)中报道的以单克隆抗体-多克隆抗体夹心原理建立的酶联免疫吸附方法ELISA检测禽流感病毒抗原，以及如中国专利CN104062430A报道的以单克隆抗体-单克隆抗体夹心原理建立的酶层析法检测试纸条检测流感病毒。其中，以单克隆抗体-单克隆抗体(双单抗)夹心检测抗原最为常见。

但是，在基于现有技术的反复试验摸索中发现了这样的现象：涉及双抗体(双单抗)夹心原理的快速检测产品在确定2株抗体可用于双抗体夹心检测抗原后，随之的搭配模式研究结果呈现出其中1株单克隆抗体只能用于标记而另1株单克隆抗体只能作为检测线上固定化的抗体，若将2株抗体的搭配模式改变，即将产品中2株单抗的位置互换，则会引起非特异反应或降低检测灵敏度。

另外，现有产品中样品处理液、缓冲液所含成分不一，在实际检测中往往导致靶抗原未得到充分裂解或反应不够充分。并且不同试剂盒样品处理液通常仅针对特定待检物来源样品有效，对其它动物疫病抗原未必有效(参见商品化试剂盒的说明书，多标有“不能使用其它试剂盒的样品处理液或样本稀释液”)，这导致实际检测使用其他类型的样品时灵敏度低、敏感性不好，甚至出现非特异反应，影响检测速度，严重时会使病情恶化或导致病毒肆意传播。

因此，现有技术中缺乏一种能够使双抗夹心检测抗原的标记抗体和固定抗体互换的试剂盒，也缺少一种能够解决对不同来源的样品均能充分处理以保证检测效果的试剂盒。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的一个目的是提供一种双抗夹心法酶免疫层析检测试剂盒，所述试剂盒包括酶免疫层析检测试纸条、样品处理液、缓冲液和缓冲液供应单元，其特征在于，

所述缓冲液包含磷酸盐缓冲液、大分子蛋白、Tween-20和防腐剂,以及过氧化氢脲、过氧化氢尿素、双氧水中的任一种；优选地所述磷酸盐缓冲液为pH7.4 0.1M PBS溶液；优选地所述大分子蛋白为BSA、OVA、胎牛血清中的一种或多种；优选地所述防腐剂为庆大霉素、硫酸卡那霉素、叠氮钠、硫柳汞及其盐类、Proclin300中的任一种；所述过氧化氢脲、过氧化氢尿素、双氧水的浓度为0.02％～0.2％W/V；优选地所述过氧化氢脲、过氧化氢尿素、双氧水的浓度为0.05％～0.1％W/V；进一步优选地包含pH7.4 0.1M PBS溶液、0.1％～0.5％V/V Tween-20、0.02％V/V Proclin300、0.05％V/V过氧化氢脲、以及0.5％～1％W/V的任一种BSA、OVA和胎牛血清；