[发明专利]降低由PD-L1诱导的免疫耐受性

说明书

本公开涉及用于降低与CAR T细胞疗法相关的免疫耐受性的组合物和方法。本公开的实施例包括分离的核酸序列，所述分离的核酸序列包含编码经修饰的程序性细胞死亡蛋白质1(PD‑1)的核酸序列和编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列。

本申请是2016年3月1日提交的,申请号为201680002926.1,发明名称为“降低由PD-L1诱导的免疫耐受性”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本公开涉及经修饰的细胞和使用者，尤其涉及用于降低与CAR T细胞疗法相关的免疫耐受性的组合物和方法。

背景技术

T细胞疗法已经证明了用于治疗癌症的疗效和治疗潜力。然而，它们的使用受到免疫抑制微环境的存在的限制。免疫抑制微环境包括由程序性死亡-1(PD-1)与PD-L1配体(PD-L1)之间的相互作用所诱导的免疫耐受性。PD-1是在T细胞和抗原呈递细胞上的阴性共调节受体。PD-L1由几种细胞类型(例如，肿瘤细胞和其它组织细胞)表达，并且表现为由免疫微环境进行动态调节。因此，需要解决由PD-L1诱导的免疫耐受性，以改善T细胞疗法的疗效。

发明内容

本公开的实施例涉及一种包含编码经修饰的程序性细胞死亡蛋白质1(PD-1)的核酸序列和编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列的分离的核酸序列。在某些实施例中，经修饰的PD-1和CAR被表达为基因产物，所述基因产物为单独的多肽。

在一些实施例中，CAR对存在于癌细胞上的肿瘤抗原是特异性的，并且其中所述癌细胞表达PD-L1。

在一些实施例中，肿瘤抗原包含HER2、CD19、CD20、CD22、κ轻链、CD30、CD33、CD123、CD38、ROR1、ErbB3/4、EGFR、EGFRvIII、EphA2、FAP、癌胚抗原、EGP2、EGP40、间皮素、TAG72、PSMA、NKG2D配体、B7-H6、IL-13受体α2、IL-11受体α、MUC1、MUC16、CA9、GD2、GD3、HMW-MAA、CD171、Lewis Y、G250/CAIX、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2NY-ESO-1、PSC1、叶酸受体-α、CD44v7/8、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿型乙酰胆碱受体、NKG2D配体、CD44v6、TEM1、TEM8，或者由肿瘤表达的病毒相关抗原。

在一些实施例中，与编码野生型PD-1的胞内部分的核酸序列相比，编码经修饰的PD-1的核酸序列包含一个或多个核苷酸的取代或者缺失。

在一些实施例中，与编码野生型PD-1的胞内部分的核酸序列相比，编码经修饰的PD-1的核酸序列包含多个核苷酸的缺失。在某些实施例中，经修饰的PD-1包含SEQ ID NO:14的核酸序列。

在一些实施例中，编码经修饰的PD-1的核酸序列包含编码截断的PD-1的核酸，所述截断的PD-1不包括胞内结构域。在某些实施例中，编码经修饰的PD-1的核酸序列包含SEQID NO:12的核酸序列。

在一些实施例中，与野生型PD-1相比，经修饰的PD-1包含一个或多个点突变。在某些实施例中，点突变包含野生型PD-1的磷酸化位点的一个或两个氨基酸点突变。

实施例进一步涉及一种包含如上所述的核酸序列的表达载体。在一些实施例中，表达载体是选自由以下组成的群组的病毒载体：逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。

实施例进一步涉及一种包含本公开的表达载体的细胞。在一些实施例中，所述细胞选自由以下组成的群组：T细胞、NK细胞和NKT细胞。

实施例进一步涉及一种包含抗肿瘤有效量的人T细胞群的药物组合物，其中所述人T细胞群包括包含如上所述的分离的核酸序列的人T细胞。在一些实施例中，PD-L1对所述人T细胞群的细胞因子产生的抑制作用小于PD-L1对不包含编码经修饰的PD-1的核酸序列的至少一部分的人T细胞的细胞因子产生的抑制作用。