[发明专利]Sep15蛋白的表达载体、纯化方法及其应用

说明书

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种Sep15蛋白的表达载体、纯化方法及其应用。所述表达载体包括PGBTNH2质粒以及连入所述PGBTNH2质粒中的目的基因Sep15，且所述目的基因Sep15中的硒代半胱氨酸位点突变为硫代半胱氨酸。本发明在PGBTNH2载体中连入的目的基因Sep15的C端的his‑tag标签不会表达，从而使酶切后Sep15能与带有his‑tag标签的GB‑1分离，即通过该表达载体进行转化、培养、酶切等步骤即可分离出较纯的Sep15蛋白。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种Sep15蛋白的表达载体、纯化方法及其应用。

背景技术

Sep15蛋白是一种硒蛋白，其分子质量为15KDa；Sep15蛋白跟多种疾病相关。在现有的研究和专利中，有大量的硒蛋白体内实验和阿尔兹海默病的研究，但并无Sep15蛋白重组表达以及在体外实验的研究，也无其对Tau R2(一种Tau蛋白，含量最高的微管蛋白)、Abeta(又称Aβ，一种淀粉样多肽)聚集的影响的研究。Tau蛋白或Abeta的聚集同AD的相关性更高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种Sep15蛋白的表达载体、纯化方法及其应用，旨在解决现有技术Sep15蛋白表达载体及其纯化技术有限的问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明一方面提供一种Sep15蛋白的表达载体，所述表达载体包括PGBTNH2质粒以及连入所述PGBTNH2质粒中的目的基因Sep15，且所述目的基因Sep15中的硒代半胱氨酸位点突变为硫代半胱氨酸。

本发明另一方面提供一种Sep15蛋白的纯化方法，包括如下步骤：

将本发明上述的表达载体转入大肠杆菌中，得到转化菌种；

将所述转化菌种进行诱导培养后，得到培养菌液；

将所述培养菌液超声处理，然后离心分离得到上清液；

将所述上清液进行酶切处理，然后层析分离得到所述Sep15蛋白。

本发明最后还提供一种上述表达载体在Tau蛋白和/或Abeta的聚集反应的检测中的应用。

本发明提供的Sep15蛋白的表达载体基于重组构建PGBTNH2载体得到，PGBTNH2载体上含有GB-1助溶标签，C端及N端均含有his-tag标签，而在PGBTNH2载体中连入的目的基因Sep15含有终止密码，所以其C端的his-tag标签不会表达，从而使酶切后Sep15能与带有his-tag标签的GB-1分离，即通过该表达载体进行转化、培养、酶切等步骤即可分离出较纯的Sep15蛋白。同时，通过研究证明Sep15蛋白可以抑制Tau蛋白以及Abeta的聚集反应，因此本发明的Sep15蛋白的表达载体可用于检测Tau蛋白和/或Abeta的聚集反应。

附图说明

图1为本发明实施例1中PGBTNH2质粒载体图谱：

图2为本发明实施例1中亲和层析柱纯化重组蛋白结果检测图；

图3为本发明实施例1中纯化后SDS-PAGE电泳结果图(酶切前)；

图4为本发明实施例1中BSA法蛋白浓度定量标准曲线图(酶切前)；

图5为本发明实施例1中酶切鉴定电泳结果图；

图6为本发明实施例1中镍柱亲和层析过柱结果图(酶切后)

图7为本发明实施例1中纯化后SDS-PAGE电泳结果图(酶切后)；

图8为本发明实施例1中第二次蛋白浓度测定标准曲线图；