[发明专利]Sep15蛋白的表达载体、纯化方法及其应用在审
| 申请号： | 201810279537.4 | 申请日： | 2018-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN108642072A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 田静;王恒;任冰玉 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/00;C07K1/22;G01N33/68 |
| 代理公司： | 深圳市恒申知识产权事务所(普通合伙) 44312 | 代理人： | 王利彬 |
| 地址： | 518060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达载体 目的基因 蛋白 酶切 质粒 生物工程领域 硒代半胱氨酸 半胱氨酸 硫代 位点 应用 转化 | ||
1.一种Sep15蛋白的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括PGBTNH2质粒以及连入所述PGBTNH2质粒中的目的基因Sep15，且所述目的基因Sep15中的硒代半胱氨酸位点突变为硫代半胱氨酸。
2.一种Sep15蛋白的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
将权利要求1所述的表达载体转入大肠杆菌中，得到转化菌种；
将所述转化菌种进行诱导培养后，得到培养菌液；
将所述培养菌液超声处理，然后离心分离得到上清液；
将所述上清液进行酶切处理，然后层析分离得到所述Sep15蛋白。
3.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述诱导培养的步骤包括：将所述转化菌种进行摇床扩摇培养至OD值为0.6-0.8，然后加入诱导剂，再进行摇床诱导培养。
4.如权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述摇床扩摇培养的条件包括：35-37℃恒温摇床3-4h；和/或
所述摇床诱导培养的条件包括：15-16℃恒温摇床12-24h。
5.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述超声处理的条件包括：4-6℃超声25-30min；和/或
所述离心分离的条件包括：7000-8000rpm离心25-30min。
6.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述酶切处理的步骤包括：按照4U/ml的比例向所述上清液中加入凝血酶，酶切40-48h。
7.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述层析分离为镍柱亲和层析分离。
8.如权利要求7所述的纯化方法，其特征在于，所述镍柱亲和层析分离的步骤包括：用50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、300mmol/L的咪唑浓度梯度溶液进行梯度洗脱。
9.如权利要求1所述的表达载体在Tau蛋白和/或Abeta的聚集反应的检测中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述检测的方法为ThT荧光光谱法。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于深圳大学，未经深圳大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810279537.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
