[发明专利]MDCK细胞系、复制病毒的方法及其应用

说明书

本发明涉及细胞培养领域，具体而言，涉及一种MDCK细胞系、复制病毒的方法及其应用。该细胞系保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201857，保藏时间为2018年2月10日。本发明所提供的MDCK细胞不仅适合于全悬浮培养，还能用无动物源血清培养基培养，能够使得病毒培养或疫苗生产中遭受外源污染的风险降低。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体而言，涉及一种MDCK细胞系、复制病毒的方法及其应用。

背景技术

流感病毒疫苗的制备经过了从动物组织器官到细胞培养的规模化发展过程，动物流感病毒的培养也经历了从鸡胚向哺乳动物细胞大规模培养，从哺乳动物细胞的微载体悬浮培养到全悬浮培养，从动物源血清的培养到无动物源血清或成分的培养的发展过程，并结合离心纯化以及柱层析纯化，使动物流感病毒或抗原生产方法的可控性提高，也减少了疫苗注射引起的应急反应。

尽管这样，常用的用于培养流感病毒的细胞系仍存在各种缺点，因此仍无法满足。此研究一种安全，高产的细胞基质将是现行流感疫苗工艺研究的重要问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明提供了一株适应全悬浮无血清培养的MDCK细胞系，还提供了利用所述的细胞系培养流感病毒的方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种MDCK细胞系，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201857，保藏时间为2018年2月10日。

本发明所提供的MDCK细胞系，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，武汉大学中国典型培养物保藏中心。培养物名称(分类命名)：犬肾细胞MDCK-G01。

根据本发明的一方面，本发明还涉及如上所述MDCK细胞系的衍生细胞系。

根据本发明的一方面，本发明还涉及一种复制病毒的方法，其包括：

a)培养如上所述的细胞系并接种所要复制的病毒；

b)对细胞进行温育；和

c)当其达到足够高的滴度后分离并提纯病毒粒子；

d)可选的，在步骤c)之后，再从所述病毒粒子中分离出病毒抗原并提纯。

根据本发明的一方面，本发明还涉及前述任一项权利要求所述之方法在制备病毒疫苗中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明所提供的MDCK细胞，先通过逐步降低血清含量制得低血清贴壁培养的细胞株，再经过逐步增加培养转速，细胞逐渐失去黏附瓶壁的依赖，同时也协调使用胎牛血清转变为新生牛血清，然后再配合逐渐提升无血清培养基的含量进行驯化摇床培养得到，因而该细胞不仅适合于全悬浮培养，还能用无动物源血清培养基培养，能够使得病毒培养或疫苗生产中遭受外源污染的风险降低。

(2)该细胞系生长速率快。

(3)该细胞系还具有很强的耐低氧能力，由于大型生物反应器容积较大，偶尔会发生氧气搅拌不均的问题，因而更易造成细胞缺氧死亡。该细胞系尤其适合于大型生物反应器的培养。

具体实施方式

本发明涉及一种MDCK细胞系，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201857，保藏时间为2018年2月10日。

根据本发明的一方面，本发明还涉及如上所述MDCK细胞系的衍生细胞系。

根据本发明的一方面，本发明还涉及一种复制病毒的方法，其包括：