[发明专利]用于犬瘟热病毒检测的引物和探针及其用途

权利要求书

1.用于犬瘟热病毒检测的引物和探针组合物，其特征在于：

F引物序列如SEQ ID NO:1所示，R引物序列如SEQ ID NO:2所示，探针序列如SEQ IDNO:3所示。

2.权利要求1所述的引物和探针组合物在非诊断目的LFS RT-RPA法检测犬瘟热病毒中的用途。

3.一种不依赖于检测设备的非诊断目的犬瘟热病毒可视化现场快速检测方法，其特征在于：从待测样品中提取病毒的RNA为模板，利用权利要求1所述的引物和探针组合物在RPA反应体系中进行扩增，用侧流层析试纸条对扩增结果进行检测，若质控线和检测线位置均出现红色条带，则样品中含有犬瘟热病毒，若仅在质控线位置出现红色条带，则样品中不含犬瘟热病毒，若质控线位置没有出现红色条带，则检测结果无效。

4.根据权利要求3所述的不依赖于检测设备的非诊断目的犬瘟热病毒可视化现场快速检测方法，其特征在于：所述RPA反应体系中包括反转录酶、RNA酶抑制剂、重悬缓冲液、ddH₂O、醋酸镁溶液和冻干酶制剂，所述冻干酶制剂包括dNTP、单链结合蛋白、recA重组酶、DNA聚合酶、内切核糖核酸酶、三(羟甲基)甲基甘氨酸、聚乙二醇、二硫苏糖醇和肌酸激酶。

5.根据权利要求4所述的不依赖于检测设备的非诊断目的犬瘟热病毒可视化现场快速检测方法，其特征在于：将所述引物和探针组合物、RNA模板、反转录酶、RNA酶抑制剂、重悬缓冲液和ddH₂O混匀，加入到装有所述冻干酶制剂的反应管中，吹吸至完全溶解，再加入醋酸镁溶液，盖紧管盖，离心并涡旋后，30-45℃下进行扩增，扩增反应产物用侧流层析试纸条对扩增结果进行检测，若质控线和检测线位置均出现红色条带，则样品中含有犬瘟热病毒，若仅在质控线位置出现红色条带，则样品中不含犬瘟热病毒，若质控线位置没有出现红色条带，则检测结果无效。

6.根据权利要求5所述的不依赖于检测设备的非诊断目的犬瘟热病毒可视化现场快速检测方法，其特征在于：手握反应管扩增15min。

7.一种用于犬瘟热病毒检测的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物和探针组合物。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：该试剂盒还包括M-MLV反转录酶、RNA酶抑制剂、重悬缓冲液、ddH₂O、醋酸镁溶液和冻干酶制剂，所述冻干酶制剂包括dNTP、单链结合蛋白、recA重组酶、DNA聚合酶、内切核糖核酸酶、三(羟甲基)甲基甘氨酸、聚乙二醇、二硫苏糖醇和肌酸激酶。