[发明专利]细胞分离用微珠洗脱液及配制方法

说明书

本发明公开了细胞分离用微珠洗脱液及配制方法，主要涉及细胞洗脱技术领域。每100ml中包括以下组分：IdeS酶800～1200U，半胱氨酸蛋白酶800～1200U，按质量体积浓度计牛血清蛋白BSA8％～12％和海藻糖8％～12％，以及甘氨酸4～6mmol，磷酸二氢钠4～6mmol，氯化钾4～6mmol，氯化钠4～6mmol，使用1MHcl调整洗脱液PH值为6.5。本发明能够充分利用Ides酶及甘氨酸对抗原或/和抗体结合的解离作用，克服各自的缺点，使微珠与细胞间的抗原抗体紧密结合解体，能够完全将细胞从微珠上洗脱下来而最大程度保持细胞现有的特性，从而达到在纯化细胞的前提下去除微珠的目的，效果好，反应快，能够简便经济的获得高纯度无残留的目的细胞。

技术领域

本发明涉及细胞洗脱技术领域，具体是细胞分离用微珠洗脱液及配制方法。

背景技术

细胞做为人体和动物的基本构成单位，是科研机构以及药物研究机构的重要的基础原材料。几乎所有的生物学基础研究以及药物研发都要用到细胞，细胞的产品质量直接关系到整个科研实验和药物研究的质量。细胞存在于组织或者血液中，精确的研究某种特定细胞就需要将特定细胞从不同类型的组织和血液中分离纯化出来，目前常用的细胞分离纯化方法为利用抗原抗体结合的原理将细胞与标记抗体的微珠结合，然后利用不同的物理方法将微珠分离出来，达到细胞纯化的目的。在此步骤之后，有的不对微珠与细胞进行分离，直接使用。有的使用复杂的寡聚氨基酸竞争性结合微珠表面抗体，从而分离细胞。

然而，现有的细胞分离方法，包括磁性法等，均存在微珠去除成本高、效果差的问题。主要表现在：(1)现有技术对细胞表面的微珠去除效果不佳，造成部分微珠没有去除，随着细胞进入后续的实验或人体，对实验环节及结果造成不良影响，甚至对人体造成不可逆的伤害。(2)现有技术用于去除微珠的表面结合抗体成本较高，例如合成的寡居氨基酸价格非常昂贵，大大提高了本环节的成本。上述问题普遍存在且一直未被解决，使得微珠的分离成为细胞分离的问题环节，亟待相关技术的跟进。

发明内容

本发明的目的在于提供细胞分离用微珠洗脱液及配制方法，它能够使微珠与细胞间的抗体解体，从而达到在纯化细胞的前提下去除微珠的目的，效果好，反应快，能够简便经济的获得高纯度无残留的目的细胞。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：

细胞分离用微珠洗脱液，每100ml中包括以下组分：IdeS酶800～1200U，半胱氨酸蛋白酶800～1200U，按质量体积浓度计牛血清蛋白BSA8％～12％和海藻糖8％～12％，以及甘氨酸4～6mmol，磷酸二氢钠4～6mmol，氯化钾4～6mmol，氯化钠4～6mmol。

作为一种最优配比，每100ml的上述细胞分离用微珠洗脱液中包括以下组分：IdeS酶1000U，半胱氨酸蛋白酶1000U，按质量体积浓度计牛血清蛋白BSA10％和海藻糖10％，以及甘氨酸5mmol，磷酸二氢钠5mmol，氯化钾5mmol，氯化钠5mmol。

且优选通过以下方法配得：

(1)称取6g的磷酸二氢钠，3.73g的氯化钾2.92g的氯化钠和3.75g甘氨酸，用1L的去离子水溶解，氢氧化钠调节pH值为6.5，得洗脱缓冲液；

(2)称取10g的海藻糖，用100mL的所述洗脱缓冲液溶解均匀，得第一溶液；

(3)称取10g的BSA，用100mL所述第一溶液溶解均匀，得第二溶液；

(4)称取1000U的Ides酶，1000U的半胱氨酸蛋白酶，用100mL所述第二溶液溶解均匀，得第三溶液；

(5)所述第三溶液使用1M Hcl调整PH值至6.5,使用0.22um无菌滤器过滤，即得，所得溶液在-20°保存。上述细胞分离用微珠洗脱液的使用方法为：

(1)利用连接有抗体的微珠纯化分离细胞，使得微珠表面连接有目的细胞；