[发明专利]细胞分离用微珠洗脱液及配制方法在审
| 申请号： | 201810260416.5 | 申请日： | 2018-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN108410798A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 叶永清;黄能平 | 申请（专利权）人： | 福建三一造血技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 济南鼎信专利商标代理事务所(普通合伙) 37245 | 代理人： | 曹玉琳 |
| 地址： | 350108 福建省*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微珠 细胞 洗脱液 细胞分离 甘氨酸 洗脱 配制 氯化钠 半胱氨酸蛋白酶 氯化钾 磷酸二氢钠 牛血清蛋白 简便经济 抗体结合 抗原抗体 高纯度 海藻糖 浓度计 无残留 解离 解体 对抗 | ||
1.细胞分离用微珠洗脱液，其特征在于：每100ml中包括以下组分：IdeS酶800～1200U，半胱氨酸蛋白酶800～1200U，按质量体积浓度计牛血清蛋白BSA8％～12％和海藻糖8％～12％，以及甘氨酸4～6mmol，磷酸二氢钠4～6mmol，氯化钾4～6mmol，氯化钠4～6mmol。
2.根据权利要求1所述细胞分离用微珠洗脱液，其特征在于：每100ml中包括以下组分：IdeS酶1000U，半胱氨酸蛋白酶1000U，按质量体积浓度计牛血清蛋白BSA10％和海藻糖10％，以及甘氨酸5mmol，磷酸二氢钠5mmol，氯化钾5mmol，氯化钠5mmol。
3.根据权利要求1所述细胞分离用微珠洗脱液，其特征在于：是通过以下方法配得的：
(1)称取6g的磷酸二氢钠，3.73g的氯化钾2.92g的氯化钠和3.75g甘氨酸，用1L的去离子水溶解，氢氧化钠调节pH值为6.5，得洗脱缓冲液；
(2)称取10g的海藻糖，用100mL的所述洗脱缓冲液溶解均匀，得第一溶液；
(3)称取10g的BSA，用100mL所述第一溶液溶解均匀，得第二溶液；
(4)称取1000U的Ides酶，1000U的半胱氨酸蛋白酶，用100mL所述第二溶液溶解均匀，得第三溶液；
(5)所述第三溶液使用1M Hcl调整PH值至6.5,使用0.22um无菌滤器过滤，即得，所得溶液在-20°保存。
4.根据权利要求1所述细胞分离用微珠洗脱液，其特征在于：其为PH值是5.5～6.5的无色透明溶液。
5.根据权利要求1所述细胞分离用微珠洗脱液，其特征在于：其使用方法为：
(1)利用连接有抗体的微珠纯化分离细胞，使得微珠表面连接有目的细胞；
(2)加入洗脱缓冲液，并加入相应体积的细胞洗脱液，混匀微珠；
(3)孵育20min；
(4)离心，去上清，沉淀即目的细胞，用于后续实验。
6.细胞分离用微珠洗脱液的配制方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)称取6g的磷酸二氢钠，3.73g的氯化钾2.92g的氯化钠和3.75g甘氨酸，用1L的去离子水溶解，氢氧化钠调节pH值为6.5，得洗脱缓冲液；
(2)称取10g的海藻糖，用100mL的所述洗脱缓冲液溶解均匀，得第一溶液；
(3)称取10g的BSA，用100mL所述第一溶液溶解均匀，得第二溶液；
(4)称取1000U的Ides酶，1000U的半胱氨酸蛋白酶，用100mL所述第二溶液溶解均匀，得第三溶液；
(5)所述第三溶液使用1M盐酸溶液调整PH值至6.5,使用0.22um无菌滤器过滤，即得，所得溶液在-20°保存。
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