[发明专利]一种增强型抗肿瘤融合蛋白及制备方法及用途

说明书

本发明公开了一种增强型抗肿瘤融合蛋白及制备方法及用途，所述融合蛋白包括诱导并激活T细胞的共刺激分子B7.1、诱导并激活T细胞的共刺激分子B7.2和超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A中至少两种，本发明的融合蛋白将B7.1、B7.2和SEA至少两种构建成融合蛋白，发挥出叠加放大的效果，其显示的生物活性远远超过单个原料蛋白，诱导并激活T细胞来杀死肿瘤，T细胞可分泌的细胞因子例如肿瘤坏死因子‑α(TNF‑α)、颗粒酶并诱导作为靶细胞的癌细胞产生Fas等从而导致癌细胞凋亡，实验证明本发明的各个融合蛋白对于各种癌症和实体肿瘤有着很明显的杀伤作用。

技术领域

本发明涉及一种融合蛋白及制备方法及用途，特别是涉及一种由诱导并激活T细胞的共刺激分子(Costimulatory molecules)和能引起抗癌免疫反应的超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素所构建的融合蛋白，公开了它们的结构(蛋白序列)、制备方法以及抗癌的生物活性。

背景技术

T细胞的有效活化需要两个信号的参与,即需要抗原肽-MHC复合物与T细胞上的TCR-CD3结合提供第1信号，以及共刺激分子(Costimulatory molecules)介导的第2信号。最基本的共刺激信号由抗原递呈细胞表达的B7.1(CD80)、B7.2(CD86)分子与T细胞上表达的相应受体(CD28和CTLA-4)提供(Amj Respir Crit Care Med,162,5164-5168,2000；Immunol Cell Biol,77,304-311,1999；Clin Cancer Res,13,5271-5279,2007；TrendsImmunol,24,313-318,2003)。

B7.1表达在活化的DC、B细胞和单核细胞上，B7.2在B细胞、T细胞、DC和巨噬细胞上呈低水平表达，但B7.2可被诱导快速上调，而B7.1被诱导上调表达时间比B7.2晚。初始T细胞上的CD28与APC上的B7.1/B7.2结合，可以促进IL-2转录，同时使IL-2受体在T细胞上表达增加，从而促进T细胞增殖，还可以通过增加Bcl-xl的表达途径使T细胞免于凋亡。

作为药物的应用，B7.1-Fc或B7.2-Fc可以诱导并激活抗癌的T细胞，显示出抗肿瘤的生物活性(Cancer Res,59,4964-4972,1999；Cancer Res,59,2650-2656,1999；ClinCancer Res,11,8492-8502,2005；J Immunol,172,1347-1354,2004；Cancer Res,62,5727-5735,2002)。

超抗原(Superantigen)也能引起细胞毒作用，它是一类特殊的抗原分子，主要是一些细菌的毒素和逆转录病毒基因的产物，不需要抗原提呈细胞的加工处理，而以完整的蛋白质形式直接与细胞膜上的MHC II类分子结合形成复合物，识别TCR的Vb片段，激活比普通抗原多得多的T细胞(包括CD4⁺，CD8⁺)，并释放大量细胞因子，对靶细胞产生强而有力的细胞毒作用。

超抗原与人类多种急、慢性疾病的发生有关，但在抗肿瘤研究中也发挥了独特的作用，尝试用它激活的T细胞来杀伤肿瘤，并取得了一定的成果，目前较有研究基础的超抗原主要是金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C等(Technol Cancer Res Treat,16,125-132,2017；Biosci Biotechnol Biochem,81,1741-1746,2017；Anticancer Res,25,3565-3573,2005；Biochem Biophys Res Commun,290,1336-1342,2002；Cancer Immunol Immunother,33,231-237,1991)。

目前，尚未有使用各种诱导或刺激T细胞分子联合用于肿瘤治疗的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种增强型抗肿瘤融合蛋白。

本发明的第二个目的是提供一种增强型抗肿瘤融合蛋白的制备。