[发明专利]一种用于制备DNA Ladder的引物对、DNA片段及方法有效
| 申请号： | 201810257231.9 | 申请日： | 2018-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN108504655B | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 董伟仁 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/6806;C12Q1/6876 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 付晶 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 制备 dna ladder 引物 片段 方法 | ||
1.一种用于制备DNA Ladder的引物对，包括上游引物和下游引物，其特征在于，所述上游引物包括位于5’端的第一互补结合区和位于3’端的第一模板结合区，所述下游引物包括位于5’端的第二互补结合区和位于3’端的第二模板结合区，所述第一互补结合区序列和第二互补结合区序列反向互补。
2.如权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述第一互补结合区和第二互补结合区的退火温度为55℃～70℃。
3.如权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述第一互补结合区和第二互补结合区的长度为15～30bp。
4.一种制备DNA Ladder的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)使用如权利要求1～3任一所述的引物对扩增相应的模板或者互为模板进行第一次PCR扩增，获得双链DNA片段，
其中，当上游引物的第一模板结合区与下游引物的第二模板结合区两者3’端的一定长度的序列可以互补配对时，上游引物和下游引物互为模板进行第一次PCR扩增，否者扩增相应的模板；
(2)将步骤(1)所得的双链DNA片段同时作为引物及模板进行第二次PCR扩增，获得所述DNA Ladder。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述DNA Ladder的梯度长度为20～250bp。
6.一种用于制备DNA Ladder的双链DNA片段，其特征在于，包括正义链和反义链，所述正义链包括两端的第一互补结合区和中间的间隔序列，所述反义链包括两端的与所述第一互补结合区序列反向互补的第二互补结合区和中间的与所述间隔序列反向互补的间隔互补序列。
7.如权利要求6所述的双链DNA片段，其特征在于，利用如权利要求1所述的引物对扩增相应的模板或者互为模板进行PCR扩增制得，
其中，当上游引物的第一模板结合区与下游引物的第二模板结合区两者3’端的一定长度的序列可以互补配对时，上游引物和下游引物互为模板进行PCR扩增，否者扩增相应的模板。
8.用于制备DNA Ladder的单链DNA片段对，其特征在于，包括正义链和反义链，所述正义链包括两端的第一互补结合区和中间的间隔序列，所述反义链包括两端的与所述第一互补结合区序列反向互补的第二互补结合区和中间的与所述间隔序列反向互补的间隔互补序列。
9.一种制备DNA Ladder的方法，其特征在于，包括以下步骤：将如权利要求6或7所述的双链DNA片段或如权利要求8所述的单链DNA片段对同时作为引物及模板进行PCR扩增获得所述DNA Ladder。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述DNA Ladder的梯度长度为20～250bp。
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