[发明专利]来源于无色杆菌属CCM 4824的青霉素G酰化酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种突变青霉素G酰化酶，其特征为，在包含SEQ ID NO.1所示的α亚基和SEQ IDNO.2所示的β亚基的野生型青霉素G酰化酶蛋白质序列中，包含选自A65αV、A102αE、A106αT、D74βQ、R120βC、T176βS、Y180βS、T193βI、Y248βF、F254βY、T292βS、F343βY、E366βV及T485βS组合的群中的至少一种突变。

2.根据权利请求第1项所述的突变青霉素G酰化酶，其特征为，在所述野生型青霉素G酰化酶蛋白质序列中，包含D74βQ、T176βS、T193βI、E366βV及T485βS的突变。

3.根据权利请求第2项所述的突变青霉素G酰化酶，其特征为，

所述突变青霉素G酰化酶

包含SEQ ID NO.1所示的α亚基；

及SEQ ID NO.5所示的β亚基。

4.根据权利请求第2项所述的突变青霉素G酰化酶，其特征为，所述突变青霉素G酰化酶追加包含选自A102αE、A168αV、Y180βS、F254βY及S428βA组合的群中的至少一种突变。

5.根据权利请求第4项所述的突变青霉素G酰化酶，其特征为，所述突变青霉素G酰化酶包含A102αE、Y180βS及F254βY的突变。

6.根据权利请求第5项所述的突变青霉素G酰化酶，其特征为，

所述突变青霉素G酰化酶

包含SEQ ID NO.7所示的α亚基；

及SEQ ID NO.8所示的β亚基。

7.根据权利请求第4项所述的突变青霉素G酰化酶，其特征为，所述突变青霉素G酰化酶追加包含选自Q10αK、A65αV、I5βV、R120βC、R185βC、Y248βF及F343βY组合的群中的至少一种突变。

8.根据权利请求第7项所述的突变青霉素G酰化酶，其特征为，所述突变青霉素G酰化酶包含A65αV、R120βC、Y248βF及F343βY的突变。

9.根据权利请求第8项所述的突变青霉素G酰化酶，其特征为，

所述突变青霉素G酰化酶

包含SEQ ID NO.10所示的α亚基；

及SEQ ID NO.11所示的β亚基。

10.一种编码权利请求第1项至第9项中任何一项的突变青霉素G酰化酶的多核苷酸。

11.一种包含权利请求第10项的多核苷酸的重组表达载体。

12.一种通过权利请求第11项的表达载体性质转化的宿主细胞。

13.根据权利请求第12项所述的性质转化的宿主细胞，其特征为，

所述宿主细胞选自梭菌属、大肠杆菌属、醋酸菌属、气单胞菌属、产碱杆菌属、丝枝霉属、芽孢杆菌属、头孢菌属、黄杆菌属、克吕沃尔菌属、枝动菌属、精蛋白杆菌属、假单胞菌属、无色杆菌属和黄单胞菌属组合的群中的任意一个属的微生物。

14.根据权利请求第13项所述的性质转化的宿主细胞，其特征为，所述大肠杆菌属微生物是被重组表达载体即包含编码SEQ ID NO.10所示的α亚基和SEQ ID NO.11所示的β亚基的多核苷酸的重组表达载体性质转化的大肠杆菌MC1061/pBC-CEP3-s28,寄存号KCTC13390BP。

15.一种制备β-内酰胺抗生素的方法，其特征为，在包括活化的侧链和β-内酰胺核的酶促耦合的β-内酰胺抗生素制备方法中，使用第1项至第9项中任意一项的突变青霉素G酰化酶。