[发明专利]一种S-poly(T)PCR技术检测已知血液中表达的485miRNA的方法

权利要求书

1.一种S-poly(T)PCR技术检测已知血液中表达的485miRNA的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)初筛阶段：将结直肠癌53例以及健康人87例分别混合为一份进行筛选，利用S-poly(T)PCR技术，对已知血液中表达的485miRNA进行检测，分析筛选出存在显著性异常表达的miRNA；

2)复筛阶段：将此前53例结直肠癌样本按照TNM分期，将结直肠癌I-II期33例、结直肠癌III-IV期20例及健康人87例样本分别混合成一份，利用S-poly(T)PCR技术，对第一步中筛选出差异表达的miRNA进行检测，选出备选miRNA用于单个验证；

3)验证阶段：对48例结直肠癌、20例结直肠非癌性息肉、47例健康人血浆样本进行单个验证，分析各miRNA表达水平与病理分期、肿瘤大小、肿瘤位置等的相关性，评估miRNA对结直肠癌的临床诊断能力。

2.根据权利要求1的一种S-poly(T)PCR技术检测已知血液中表达的485miRNA的方法，其特征在于：所述初筛阶段对本院收集的53例结直肠癌、87例健康人分别做血浆混合样本，利用S-poly(T)PCR技术检测485个miRNA，按照以下标准：FC(fold change)>1或FC<-1、p<0.05，单个样本Ct值<35，筛选出显著差异的16种miRNA，其中2种miRNA上调，14种miRNA下调。

3.根据权利要求1的一种S-poly(T)PCR技术检测已知血液中表达的485miRNA的方法，其特征在于：所述复筛阶段利用S-poly(T)PCR技术检测16种miRNA，按照三组间均差异表达的标准，最终选定9种miRNA用于单个验证，其中8种miRNA下调表达，1种miRNA上调表达。

4.根据权利要求1的一种S-poly(T)PCR技术检测已知血液中表达的485miRNA的方法，其特征在于：所述验证阶段对48例结直肠癌、20例非癌性息肉、47例正常对照组血浆样本进行单个验证，结果显示：其中7种miRNA可显著区分结直肠癌与正常人：miR-27a-3p(t＝6.11，p<0.00)、miR-144-3p(t＝7.34，p<0.00)、miR-148a-3p(t＝5.01，p<0.00)、miR-423-3p(t＝6.48，p<0.00)、miR-424-5p(t＝6.68，p<0.00)、miR-425-5p(t＝7.74，p<0.00)、miR-1260b(t＝4.87，p<0.00)，此7种miRNA均为下调表达。

5.根据权利要求1的一种S-poly(T)PCR技术检测已知血液中表达的485miRNA的方法，其特征在于：所述验证阶段中结直肠癌组样本miR-27a-3p、miR-143-3p、miR-144-3p、miR-148a-3p、miR-423-3p、miR-424-5p、miR-425-5p、miR-483-5p、miR-1260b的FC采用2^-ΔΔCt值法(FC(fold change)＝2^-ΔΔCt，ΔΔCt＝ΔCt(CRC)–ΔCt(HC)，ΔCt＝AVG(targetmiRNA)–AVG(miR-54))计算。