[发明专利]一种包含阿片受体基因的检测试剂盒及其检测方法在审

申请号：	201810247682.4	申请日：	2018-03-23
公开（公告）号：	CN108456724A	公开（公告）日：	2018-08-28
发明（设计）人：	王钦文;许春双;常岚;刘桂利;陈韦华	申请（专利权）人：	宁波大学
主分类号：	C12Q1/6883	分类号：	C12Q1/6883;C12N15/11
代理公司：	宁波鄞州全方专利商标事务所(普通合伙) 33242	代理人：	胡雅芳;马树鹏
地址：	315000 浙江省***	国省代码：	浙江;33
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摘要：
搜索关键词：	阿片受体基因甲基化特异性阿尔茨海默病启动子区检测试剂扩增引物检测甲基化水平测序引物辅助诊断经济节约上游引物下游引物甲基化患病率灵活治疗发现
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【说明书】：

一种包含阿片受体基因的检测试剂盒，包含两对阿片受体基因OPRM1和OPRL1启动子区甲基化特异性扩增引物及两个甲基化特异性测序引物，所述两对阿片受体基因OPRM1和OPRL1启动子区甲基化水平与阿尔茨海默病的患病率呈正相关；同时，所述两对阿片受体基因OPRM1和OPRL1启动子区甲基化特异性扩增引物均包括甲基化特异性上游引物和甲基化特异性下游引物。本发明通过检测与阿尔茨海默病相关的两对阿片受体基因启动子区甲基化程度辅助诊断阿尔茨海默病，简单、方便，检测效率高，针对性强，具有准确可靠、灵活快速和经济节约的优点，有利于阿尔茨海默病的早起发现和及时治疗。

技术领域

本发明涉及检测阿尔茨海默病的试剂盒技术领域，尤其涉及一种包含阿片受体基因的检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一种系统性神经退行性疾病，其临床表现为高级认知功能低下，主要特征包括脑细胞内神经纤维缠结及细胞外老年斑。阿尔茨海默病患者需要终生护理，因此给社会和家庭带来极大的经济负担。阿尔茨海默病是一种由遗传因素和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病，寻找阿尔茨海默病相关基因进而阐明痴呆症发病的遗传机制已经成为目前研究的热点。虽然有越来越多的医学研究机构重视并开展阿尔茨海默病的病因研究，且研究多集中于相关候选基因的单核苷酸多态性与阿尔茨海默病的关联性上，但其发病机理仍未被完全阐释清楚，这无疑妨碍了阿尔茨海默病预防及治疗水平的提高。

阿片受体(opioid receptor)广泛存在于人的神经系统中。μ阿片受体(mu-opioidreceptor)由OPRM1基因编码，是吗啡的主要靶分子及其药理作用的主要目标。有趣的是，最近的研究结果表明，μ阿片受体能够减轻β蛋白低聚物诱导的神经毒性。阿片受体孤啡肽受体1(OPRL1)在中枢神经系统中广泛表达，包括海马齿状回的皮层，纹状体，丘脑，下丘脑。OPRL1已发现在认知中起着重要的作用，同时参与炎症调节和免疫反应。此外，本申请人之前还研究得到，κ阿片受体基因(OPRK1)与δ阿片受体基因(OPRD1)甲基化的增加与阿尔茨海默病发病有紧密的联系。

目前，国内外还没有公开任何关于用于检测与阿尔茨海默病相关的阿片受体基因启动子区甲基化程度的检测试剂盒相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测准确率高，针对性强、检测方便的一种辅助诊断阿尔茨海默病的检测试剂盒及其检测方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

优选地，所述阿片受体基因OPRM1启动子区甲基化特异性扩增引物包括以下核苷酸序列：

所述OPRM1甲基化特异性上游引物包括以下核苷酸序列：

5'-biotin-TAGTTAGGATTGGTTTTTGTAAGAAATAG-3'；

所述OPRM1甲基化特异性下游引物包括以下核苷酸序列：

5'-ATACCCCAAAACATCAATACAATTACTAAC-3'；

所述OPRM1甲基化特异性测序引物包括以下核苷酸序列：

5'-CTATACCAAATAACCAAAAACAC-3'；

优选地，所述阿片受体基因OPRL1启动子区甲基化特异性扩增引物包括以下核苷酸序列：