[发明专利]一种利用天然双碳源高产N-乙酰神经氨酸的重组菌有效
| 申请号： | 201810239281.4 | 申请日： | 2018-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN108424868B | 公开（公告）日： | 2020-11-03 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;堵国成;刘延峰;王淼;张晓龙 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P17/06;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 天然 碳源 高产 乙酰 神经 氨酸 重组 | ||
1.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，利用天然双碳源生产N-乙酰神经氨酸；所述天然双碳源为葡萄糖和L-苹果酸，在其基因组中以组成型强启动子P43过表达磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因pckA，所述重组枯草芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis168ΔnagPΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔ1dhΔptaΔptsG::lox72；Δctc::p43-Gna1为出发菌株，在基因组上将大肠杆菌来源的6-磷酸葡糖酸磷酸酶基因yqaB基因进行整合表达，并用组成型强启动子P43替换插入枯草芽孢杆菌谷氨酰胺-果糖-6-磷酸转氨酶基因glms原始启动子，所述磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述6-磷酸葡糖酸磷酸酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.2，替换谷氨酰胺-果糖-6-磷酸转氨酶的P43启动子的核苷酸序列为SEQ ID NO.4；还以pP43NMK表达N-乙酰氨基葡萄糖异构酶的编码基因AGE和N-乙酰神经氨酸合酶的编码基因NeuB。
2.构建权利要求1所述重组枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶编码基因pckA两侧同源臂基因、标记基因和P43启动子基因序列融合；
2)将上述重组整合片段转化至枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis168ΔnagPΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔ1dhΔptaΔptsG::lox72；Δctc::p43-Gna1；ΔspsC::p43-yqaB；Δglms::p43-glms,pP43NMK-AGE-NeuB中。
3.一种生产N-乙酰神经氨酸的方法，其特征在于，应用权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌进行发酵。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，向含有葡萄糖和L-苹果酸的培养基中接种所述重组枯草芽孢杆菌，于35～38℃下发酵30～50h。
5.权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌在生产或制备含N-乙酰神经氨酸的产品方面的应用。
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