[发明专利]基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂及检测方法

说明书

本发明涉及生物医学和生物检测技术领域，具体涉及一种测定血清中降钙素原的试剂及其检测方法，尤其是一种基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂、检测方法以及其在诊断中的应用。本发明检测试剂由发光底物液A、发光底物液B、包被板、酶结合物、浓缩洗涤液、校准品和质控品组成；其中包被板上包被有降钙素原纳米抗体，酶结合物中包含酶标记的降钙素原纳米抗体。实验表明，本发明检测试剂及检测方法具有操作简便、特异性强、灵敏度高、检测速度快、获得检测结果时间短、检测结果准确可靠等特点，实验中的检测准确率达到了100％。

技术领域

本发明涉及生物医学和生物检测技术领域，具体涉及一种测定血清中降钙素原的试剂及其检测方法，尤其是一种基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂、检测方法以及其在诊断中的应用。

背景技术

降钙素原(procalcitonin，简写为PCT)是一种人体血液中的蛋白质，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高，而自身免疫、过敏和病毒感染时PCT不会升高，同时，局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致其升高。PCT反映了全身炎症反应的活跃程度，影响PCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。

PCT的检测对于指导临床治疗和评价治疗效果具有重要的意义。传统的检测方法主要采用双抗体夹心法的酶联免疫技术或者化学发光技术，例如，发明专利“一种降钙素原的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法”(CN201410143487.9)公开了一种包括降钙素原系列标准品、偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液、羟基琥珀酰亚胺生物素酯标记的抗降钙素原单克隆抗体溶液和含碱性磷酸酶标记的抗降钙素原单克隆抗体溶液的降钙素原化学发光定量检测试剂盒；发明专利“一种检测降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法”(CN201110201457.5)公开了一种包括发光底物、磁微粒偶联抗体、降钙素原单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记链霉亲和素的降钙素原检测试剂盒。然而，上述方法皆需要分别包被和标记一对针对PCT的单克隆抗体，而单克隆抗体在高温和强酸强碱条件下会分解，需要在零度以下保存，否则会在数周内失去活性，稳定性差，另外传统的单克隆抗体还有溶解度低及制备困难等方面的问题，同时，传统单克隆抗体的大分子特性等也严重制约了其广泛应用。

不仅如此，除了检测稳定性和灵敏度还有待提高外，现有的采用单克隆抗体检测试剂的化学发光检测方法还存在操作过程复杂、耗时较长、获得检测结果较慢等缺陷。

发明内容

为了克服现有降钙素原检测方法中存在的上述不足，本发明旨在提供一种基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂及检测方法，本发明检测试剂及方法可快速、准确的测定血清中的降钙素原，进而可用于临床诊断。

截止目前，尚未见到基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂和检测方法的相关报道，也没有适用于临床诊断的类似检测试剂盒产品问世。

首先，本发明提供了一种基于纳米抗体的降钙素原化学发光检测试剂，该检测试剂由发光底物液A、发光底物液B、包被板、酶结合物、浓缩洗涤液、校准品和质控品组成；

其中，所述包被板上包被有降钙素原纳米抗体，所述酶结合物中包含酶标记的降钙素原纳米抗体；

所述降钙素原纳米抗体具有如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的VHH链。

进一步地，本发明检测试剂中所述的包被板经下述步骤制备而成：

(1)将5.8g十二水磷酸氢二钠和0.59g二水磷酸二氢钠混合后溶解在1L纯化水中，搅拌均匀得到包被缓冲液；

(2)向所得包被缓冲液中加入降钙素原纳米抗体1ml，混匀后按每孔100μl加入到空白包被板中，4℃静置过夜；